2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、該文構(gòu)建出人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子和缺氧反應(yīng)啟動(dòng)子雙調(diào)控的可攜帶抗癌基因減毒增殖型腺病毒CNHK500,通過體外實(shí)驗(yàn)對(duì)CNHK500的選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞的能力進(jìn)行評(píng)估,并進(jìn)一步觀察不同給藥途徑CNHK500對(duì)裸鼠移植瘤的治療效果,對(duì)其抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行初步探討.方法和結(jié)果:1、人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子和缺氧反應(yīng)啟動(dòng)子雙調(diào)控減毒增殖型腺病毒CNHK500的構(gòu)建和制備;2、雙調(diào)控增殖腺病毒CNHK500體外抗腫瘤療效觀察;CNHK500的E1A、E

2、1B蛋白表達(dá)檢測(cè):通過Western blot檢測(cè)CNHK500的E1A、E1B蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)重組病毒CNHK500的E1A蛋白表達(dá)存在細(xì)胞差異性,在腫瘤細(xì)胞(HT29、PANC-1、HepGⅡ、Hep3B)中可檢測(cè)到腺病毒早期蛋白E1A的表達(dá),而在正常細(xì)胞中(MRC-5、IMR-90、BJ)中則難以檢測(cè)到E1A的表達(dá),說明人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子可以有效調(diào)控E1A基因的表達(dá).病毒增殖實(shí)驗(yàn):分別用重組腺病毒CNHK500感染不同來源的腫瘤

3、細(xì)胞株,觀察不同時(shí)相(0h、12h、24h、48h、96h)的病毒增殖情況,發(fā)現(xiàn)CNHK500在腫瘤細(xì)胞中能隨時(shí)間而大量復(fù)制增殖.熒光顯微鏡鏡檢觀察病毒增殖情況:將攜帶綠色熒光蛋白報(bào)告基因的腺病毒CNHK500-EGFP分別轉(zhuǎn)染正常細(xì)胞BJ及腫瘤細(xì)胞SMMC-7721、Hep3B、PANC-1,轉(zhuǎn)染后第3、7、10天在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況.細(xì)胞病理效應(yīng)(CPE).細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)(MTT):按不同的MO1值將CNHK500

4、感染肝癌細(xì)胞株Hep3B、HepGⅡ及正常細(xì)胞株BJ、WRL-68細(xì)胞,計(jì)算出IC<,50>值.3.雙調(diào)控增殖腺病毒CNHK500治療裸鼠移植瘤的療效觀察;瘤內(nèi)注射CNHK500治療裸鼠SMMC-7721移植瘤:靜脈注射CNHK500治療裸鼠Hep3B移植瘤劑量-療效及生存期觀察:結(jié)論:本文成功構(gòu)建了由人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子調(diào)控E1A基因、人缺氧反應(yīng)啟動(dòng)子調(diào)控E1B基因的減毒增殖型腺病毒CNHK500,體外實(shí)驗(yàn)表明重組病毒CNHK500

5、可以選擇性地端粒酶陽性的腫瘤細(xì)胞中增殖、殺傷,而在正常細(xì)胞中基本不增殖,具有選擇性腫瘤細(xì)胞增殖能力,明顯優(yōu)于單用hTERT啟動(dòng)子調(diào)控E1A基因的腺病毒CNHK300及E1B 55KD缺失的ONYX-015.用CNHK500分別治療小鼠SMMC-7721、Hep3B肝癌移植瘤模型觀察到明顯的抗腫瘤療效,治療組小鼠的腫瘤的生長速率明顯慢于對(duì)照組,且生存期顯著延長,具有明顯的量-效曲線.以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CNHK500是一種有效且安全的溶瘤病毒

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