版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:構(gòu)建F5/35纖毛嵌合型、缺失E1B55KD并攜帶治療基因Hep27的條件增殖型腺病毒,研究其對(duì)腎癌的體外治療效果。
方法:1.腺病毒穿梭質(zhì)粒pCA13-Hep27和pZD55-Hep27構(gòu)建及鑒定。
2.將pZD55、pZD55-Hep27質(zhì)粒分別與5型腺病毒骨架質(zhì)粒pBGH10,pZD55、pZD55-Hep27、pZD55-EGFP質(zhì)粒分別與F5/35纖毛嵌合型腺病毒骨架質(zhì)粒pPE35共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)
2、胞,9~14d左右出現(xiàn)病毒空斑。病毒小量擴(kuò)增后提取重組腺病毒的DNA,PCR鑒定構(gòu)建的條件增殖型腺病毒Ad5-ZD55、Ad5-ZD55-Hep27、Ad5-ZD55-EGFP(實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建)、F5/35-ZD55、F5/35-ZD55-Hep27、F5/35-ZD55-EGFP。
3.對(duì)本次試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)所需要的腺病毒Ad5-ZD55、Ad5-ZD55-Hep27、Ad5-ZD55-EGFP、F5/35-ZD55、F5/35-Z
3、D55-Hep27、F5/35-ZD55-EGFP進(jìn)行大量擴(kuò)增、純化和測(cè)定滴度。
4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)Ad5-ZD55-EGFP和F5/35-ZD55-EGFP腺病毒對(duì)腎癌ACHN、786-O、OSRC細(xì)胞及正常腎小管上皮細(xì)胞HK-2的感染效率。
5.CCK-8法檢測(cè)腺病毒Ad5-ZD55、Ad5-ZD55-Hep27、F5/35-ZD55和F5/35-ZD55-Hep27對(duì)腎癌ACHN、786-O、OSRC細(xì)胞及正常
4、腎小管上皮細(xì)胞HK-2增殖的影響。
6.結(jié)晶紫染色法檢測(cè)上述四種腺病毒對(duì)腎癌ACHN、786-O、OSRC細(xì)胞及正常腎小管上皮細(xì)胞HK-2的細(xì)胞毒作用。
結(jié)果:1.酶切鑒定及測(cè)序證實(shí)質(zhì)粒pZD55-Hep27構(gòu)建正確。
2.六種腺病毒大量擴(kuò)增后的滴度分別為:Ad5-ZD55:1.26×108 pfu/ml;Ad5-ZD55-Hep27:1.9×109 pfu/ml;Ad5-ZD55-EGFP:1.25×10
5、9 pfu/ml;F5/35-ZD55:2.5×108 pfu/ml; F5/35-ZD55-Hep27:1.0×108 pfu/ml;F5/35-ZD55-EGFP:1.5×108 pfu/ml。
3.流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):Ad5-ZD55-EGFP、F5/35-ZD55-EGFP重組腺病毒感染腎癌ACHN、786-O、OSRC細(xì)胞及正常腎小管上皮HK-2細(xì)胞48h后,通過熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞中綠色熒光蛋白表達(dá),結(jié)果顯
6、示F5/35-ZD55-EGFP腺病毒在腎癌細(xì)胞ACHN、786-O中的感染效率明顯增加,對(duì)腎癌細(xì)胞OSRC和正常腎小管上皮細(xì)胞HK-2中的感染效率較低。
4.CCK-8、結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)顯示四種病毒對(duì)腎癌ACHN、786-O細(xì)胞均有殺傷作用且能抑制其增殖,且CCK-8法顯示病毒對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用與病毒的濃度存在正相關(guān)性;在腎癌786-O、ACHN細(xì)胞中F5/35-ZD55-Hep27組的殺傷作用、增殖抑制作用最強(qiáng),P<0.0
7、5,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Ad5-ZD55-Hep27組及F5/35-ZD55組作用其次,兩組間無差異(P>0.05); Ad5-ZD55組對(duì)腎癌細(xì)胞的殺傷、增殖抑制作用最弱,P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在腎癌OSRC細(xì)胞中Ad5-ZD55-Hep27組對(duì)其殺傷、增殖抑制作用最強(qiáng),P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Ad5-ZD55組及F5/35-ZD55-Hep27組作用其次,兩組間無差異(P>0.05);F5/35-ZD55組對(duì)腎癌細(xì)胞
8、的殺傷作用、增殖抑制作用最弱,P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四種病毒在低感染復(fù)數(shù)時(shí)對(duì)HK-2細(xì)胞均無明顯殺傷及增殖抑制作用作用。
結(jié)論:1.成功構(gòu)建條件增殖型腺病毒Ad5-ZD55、Ad5-ZD55-Hep27、F5/35-ZD55、F5/35-ZD55-Hep27、F5/35-ZD55-EGFP。
2.條件增殖型腺病毒F5/35-ZD55-Hep27可以在腎癌細(xì)胞中特異性表達(dá),且對(duì)腎癌細(xì)胞的增殖具有較好的抑制作用
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Ad5-F35嵌合型增殖腺病毒SG235-TRAIL治療胃癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 攜帶IL-24雙調(diào)控條件增殖型腺病毒的構(gòu)建及其靶向治療腎癌體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- Ki67啟動(dòng)子調(diào)控的荷載雙基因RNA干擾的條件增殖腺病毒靶向治療腎癌體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 荷載Ki67小干擾RNA的條件增殖腺病毒介導(dǎo)的腎癌靶向治療的研究.pdf
- 攜帶超抗原SEA基因的選擇性增殖腺病毒治療膀胱腫瘤的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 攜帶趨化因子CCL5的Ad5-11嵌合型增殖腺病毒對(duì)肝癌殺傷作用的研究.pdf
- CIK細(xì)胞荷載攜帶IL-2嵌合型雙調(diào)控溶瘤腺病毒聯(lián)合抗腎癌體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 荷載管家基因shRNA的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的構(gòu)建及其體外抑制腎癌生長的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 雙調(diào)控減毒增殖腺病毒CNHK500治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 腫瘤特異性增殖腺病毒CNHK 500治療乳腺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- Ki67啟動(dòng)子調(diào)控荷載雙基因RNA干擾的條件增殖腺病毒的構(gòu)建.pdf
- 靶向乳腺癌的增殖腺病毒載體的研究.pdf
- 攜帶p53基因的雙調(diào)控減毒增殖腺病毒治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 38282.構(gòu)建六鄰體蛋白嵌合的5型腺病毒載體
- 含HIV-1 gag基因的重組腺病毒5型與35型嵌合病毒免疫效果研究.pdf
- Ki67啟動(dòng)子調(diào)控的荷載雙基因RNA干擾的條件增殖腺病毒抑制人腎癌裸鼠移植瘤生長的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 白細(xì)胞介素-18條件增殖腺病毒的構(gòu)建和體外抗腫瘤活性的研究.pdf
- 條件增殖腺病毒介導(dǎo)IL-18靶向治療惡性黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 選擇性增殖腺病毒凈化造血干細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞混合物的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 雙靶向增殖型腺病毒SG502-p53治療鼻咽癌的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論