神經母細胞瘤VEGF表達的臨床意義及Bevacizumab體外抗腫瘤作用的研究.pdf

1、神經母細胞瘤(neuroblastoma，NB)是兒童最常見的惡性實體瘤之一，惡性程度高，進展快，大部分患者診斷時已是晚期，但經積極的綜合治療可獲得緩解，然而復發(fā)率高，生存率僅30％左右。因此需要探索治療NB的新途徑。血管內皮細胞生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是一種具有促進血管內皮細胞有絲分裂活性的血管形成因子，近年來的研究表明在NB的血管生成及NB細胞的增殖過程中VEGF發(fā)揮重要作

2、用，與腫瘤的生長、侵襲、轉移密切相關，其表達高低與預后相關。VEGF通過上調bcl-2和survivin表達保護細胞免受凋亡刺激的影響。因此，抑制VEGF功能，減少細胞外VEGF含量，一方面可能影響VEGF與其受體特別是KDR結合，通過影響自分泌途徑，干擾其下游細胞內信號傳導通路，影響細胞生長、增殖，另一方面可以下調bcl-2和survivin表達，導致細胞凋亡增多，并可與化療藥物協(xié)同作用發(fā)揮抗腫瘤效應。 目的：探討NB患者腫瘤

3、組織中VEGF及其受體的表達與臨床的關系；探討NB患者血清VEGF水平的臨床意義；探討VEGF單克隆抗體——Bevacizumab對人NB細胞株(SK-N-SH)分泌VEGF的影響；探討B(tài)evacizumab單藥在體外對NB細胞生長、增殖和細胞周期的影響，以及聯合化療藥物對NB有無抗腫瘤的協(xié)同作用。研究VEGF及其受體在NB中的作用機制，了解NB發(fā)生、發(fā)展及轉移的分子生物學特征，從而探索NB的治療新途徑。 材料方法：本研究收集N

4、B患者腫瘤組織標本29例，中位年齡4歲，男性17例，女性12例，Ⅲ期11例，Ⅳ期18例，采用免疫組化法測定NB患者腫瘤組織中VEGF、VEGFR表達情況；收集初治或復發(fā)NB患者的血清30份，中位年齡4歲，男性21例，女性9例，Ⅲ期12例，Ⅳ期18例。完全緩解或良好的部分緩解患者的血清24份，中位年齡5歲，男性15例，女性9例。Ⅲ期9例，Ⅳ期15例，并對其中16例治療后獲得完全緩解的患者治療前后分別取血清進行檢測。另取28例健康兒童血清標

5、本作為對照，男17例，女11例，中位年齡7歲。采用ELISA法測定NB患者血清VEGF水平及Bevacizumab對人神經母細胞瘤細胞株SK-N-SH細胞上清液VEGF水平的影響；采用MTT法測定Bevacizumab對NB的細胞毒性作用及Bevacizumab聯合化療藥物對NB的細胞毒性作用；采用流式細胞儀法測定不同濃度Bevacizumab對NB細胞周期和細胞凋亡的影響及Bevacizumab聯合不同化療藥物對細胞周期和細胞凋亡的影

6、響。 結果：(1)NB腫瘤組織VEGF表達陽性22例，占75.9％，受體FLT-1陽性11例，占37.9％，KDR陽性21例，占72.4％。其中VEGF與FLT-1表達無相關性(p=0.68)，而與KDR表達具有相關性(p=0.04)。(2)初治/復發(fā)組患者血清VEGF水平(558.58±173.78ng/L)明顯高于對照組(300.46±99.14ng/L)及完全緩解/良好部分緩解(CR/GPR)組(216.62±83.36n

7、g/L)(p＜0.05)；Ⅲ期、Ⅳ期患者血清VEGF水平無明顯差異(p＞0.05)。16例CR患者治療后VEGF水平(326.96±208.82ng/L)明顯低于治療前水平(540.57±329.58ng/L)(p＜0.05)。(3)Bevacizumab雖呈劑量、時間依賴性抑制SK-N-SH細胞生長，但其抑制率均小于15％；呈時間依賴性影響細胞周期分布，隨作用時間延長G0-G1期細胞比例逐漸降低，S期細胞比例逐漸升高。低、中濃度(5μ

8、g/ml、10μg/ml)時，未發(fā)現明顯細胞凋亡，高濃度(50μg/ml)時，可誘導細胞凋亡。Bevacizumab與化療藥物DDP、VP16聯用時，可降低化療藥物的半數抑制濃度(IC50)，提高化療藥物的細胞毒作用，增敏倍數分別為4.72倍、9.79倍，同時可誘導細胞調亡，但不改變化療藥物對細胞周期的影響；與化療藥物VCR、THP聯用時，無明顯化療增敏作用，未明顯增加細胞凋亡，且不改變化療藥物對細胞周期的影響。 結論：(1)V