芳維A酸乙酯對體外培養(yǎng)小鼠腎小球系膜細胞增殖、凋亡及TGF-β1分泌的影響.pdf

1、背景:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematiosus,SLE)是一種累及多系統(tǒng)的自身免疫病。SLE常累及腎臟引起狼瘡性。腎炎(lupus nephritis,LN),其病理表現(xiàn)主要是腎小球系膜細胞(glomerular mesangial cells,GMC)大量增殖。增生的GMC通過分泌大量基質(zhì)及多種細胞因子,在腎臟損傷及炎癥反應(yīng)中扮演著重要角色。隨著病情發(fā)展,LN患者的腎功能可逐漸惡化,甚至發(fā)生尿毒癥導(dǎo)致

2、患者死亡。目前臨床上對于LN的治療主要使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等,但由于這些藥物可引起免疫抑制、嚴重感染、誘發(fā)腫瘤等多種嚴重不良反應(yīng),以及部分患者不能耐受等原因而限制了其療效,研發(fā)副作用小、療效佳的新藥勢在必行。既往研究發(fā)現(xiàn),第一代維A酸類(retinoids)藥物--全反式維A酸(all-trans retinoic acid,atRA)應(yīng)用于SLE小鼠模型中能夠延緩LN病程,減輕腎臟病理損傷,減少尿蛋白。全反式維A酸的相關(guān)作用機制

3、包括抑制GMC增殖、誘導(dǎo)GMC凋亡、抑制GMC分泌多種細胞因子和細胞外基質(zhì)。然而第一代、第二代維A酸制劑存在著明顯的致畸、肝功能損害及皮膚黏膜干燥等不良反應(yīng),嚴重制約了將它們應(yīng)用于LN的治療的臨床可行性。第三代維A酸類藥物引入了能特異性識別維A酸受體的多芳香環(huán)狀結(jié)構(gòu),使其作用的選擇性提高,從而并減少了不良反應(yīng)。本課題組觀察了第三代維A酸類藥物--芳維A酸乙酯(arotinoid ethylester,AE)對體外培養(yǎng)GMC增殖、凋亡、轉(zhuǎn)

4、化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)分泌的影響,以探討并評價第三代維A酸類藥物治療腎臟炎性病變的可行性。
　　 目的:研究AE對體外培養(yǎng)小鼠GMC增殖、凋亡及TGF-β1、IL-6表達的影響;比較三種不同藥物AE、atRA、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)對體外培養(yǎng)小鼠GMC增殖、凋亡及TGF-β1、I

5、L-6表達影響的差異;以探討第三代維A酸類藥物AE對腎臟炎癥,特別是對LN的潛在作用。
　　 方法:(1)MTT法檢測不同濃度和不同時相點AE、atRA、CTX對GMC增殖的影響。(2)采用流式細胞儀檢測不同濃度AE、atRA、CTX干預(yù)后GMC的凋亡情況。(3)采用ELISA法檢測不同濃度AE、atRA、CTX干預(yù)后GMC培養(yǎng)上清液中TGF-β1、IL-6的含量。
　　 結(jié)果:(1)MTT結(jié)果顯示,與對照組相比,AE、

6、atRA、CTX均可以抑制GMC增殖,呈時間和劑量依賴關(guān)系。其中AE的抑制作用明顯強于atRA、CTX,而CTX只有在高劑量時才可抑制GMC增殖。(2)Annexin V/PI雙標法流式細胞術(shù)檢測顯示:與對照組相比,AE、atRA、CTX均可以誘導(dǎo)GMC發(fā)生凋亡。其中AE誘導(dǎo)凋亡的效應(yīng)明顯強于atRA、CTX。(3)ELISA結(jié)果顯示:與對照組相比,AE、atRA、CTX作用后GMC分泌TGF-β1均顯著減少。AE、atRA、CTX作用