實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠的肺組織AGEs、CTGF、TGF-β1免疫組織化學(xué)觀察及圖像分析.pdf

1、目的：糖尿病(DM)是多種因素引起的以慢性高血糖為特征的代謝紊亂，可導(dǎo)致全身多系統(tǒng)損害的一組臨床綜合征。長(zhǎng)期以來(lái)，人們對(duì)DM心臟、腎臟、神經(jīng)以及視網(wǎng)膜等并發(fā)癥進(jìn)行了深入細(xì)致的研究，而對(duì)DM肺臟并發(fā)癥的研究相對(duì)較少。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)DM肺的研究更多的是圍繞肺功能的降低，其病理和病理生理機(jī)制研究很少。在長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)引起組織損傷的機(jī)制中，晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)與DM多種慢性并發(fā)癥的始動(dòng)及發(fā)展有密切關(guān)系，被公認(rèn)為是高糖毒性引起慢性組織

2、損傷的重要原因之一，AGEs在DM患者肺中的變化未見(jiàn)報(bào)道。Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞及激活的成纖維細(xì)胞通過(guò)自分泌或旁分泌方式產(chǎn)生結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)，調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞的和細(xì)胞外基質(zhì) 9extFacelluar matrix，ECM)的積聚，在肺纖維化進(jìn)展中起重要作用。CTGF是一種新發(fā)現(xiàn)的致纖維化細(xì)胞因子，被視為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-B1(TGF-β1)的下游反應(yīng)元件。TGF-β有4型，其中TGF-β1和CTGP共同在肺間質(zhì)纖維化中起重要作用。二者

3、均具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖以及參與ECM的產(chǎn)生、積聚等功能。本研究用免疫組織化學(xué)方法，觀察DM大鼠的肺組織AGEs、CTGF、TGF-β1的相關(guān)變化，來(lái)了解高糖毒性對(duì)肺組織的損害機(jī)制。 方法：48只SD(Sprague-Dawley)雄性大鼠隨機(jī)分為兩組：對(duì)照組和DM組，每組24只。鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg尾靜脈注射制造DM動(dòng)物模型，對(duì)照組尾靜脈注射等量生理鹽水，DM動(dòng)物模型血糖值均大于16.65mmol/L，造模成功。

4、對(duì)照組和DM組分別隨機(jī)分為4周亞組、12周亞組、20周亞組，每亞組8只大鼠。造模成功后4、12、20周末，分別處死大鼠，留取大鼠的肺組織，10％(體積分?jǐn)?shù))福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法觀察DM肺組織中AGEs、CTGF、TGF-β1沉積的部位及其變化。采用圖像分析軟件型圖像分析儀進(jìn)行圖像分析。 結(jié)果： (1)造模成功后的DM大鼠出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀，體重下降，活動(dòng)減弱，一般狀態(tài)差。

5、 (2)AGEs免疫組化觀察及圖像分析顯示：DM各亞組大鼠肺泡上皮細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞，支氣管粘膜上皮細(xì)胞，少量血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞可見(jiàn)大量陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞的平均灰度值低于相應(yīng)階段的對(duì)照組，且隨著DM病程的進(jìn)展逐漸降低。對(duì)照組的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞，支氣管粘膜上皮細(xì)胞可見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞。 (3)CTGF、TGF-β1免疫組化觀察及圖像分析顯示：DM4周亞組大鼠的肺間質(zhì)細(xì)胞、支氣管粘膜上皮細(xì)胞，可見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞，對(duì)照組4周亞組的大鼠

6、少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞和少數(shù)氣管粘膜上皮細(xì)胞、可見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞，兩組間做比較，肺組織陽(yáng)性細(xì)胞的平均灰度值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異：DMl2、20周亞組大鼠的肺間質(zhì)細(xì)胞、支氣管粘膜上皮細(xì)胞可見(jiàn)大量陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞的平均灰度值低于相應(yīng)階段的對(duì)照組。DM組的各個(gè)亞組的大鼠的肺組織陽(yáng)性細(xì)胞的平均灰度值隨DM病程的進(jìn)展逐漸降低。 (4)Pearson相關(guān)分析顯示：DM組的大鼠的肺組織AGEs與CTGF、 TGF-β1之間正相關(guān)。DM組CTGF與AGEs、