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文檔簡介
1、棉花纖維是天然的紡織工業(yè)原料,也是重要的經(jīng)濟(jì)、油料作物,在國民經(jīng)濟(jì)中占有重要地位。棉纖維由種子表皮細(xì)胞分化發(fā)育而成,包括長絨(lint)和短絨(fuzz)。棉花纖維突變體既是重要的種質(zhì)資源,同時(shí)還是研究纖維發(fā)育的模式材料。
徐州142無絮(XZ142w)是陸地棉栽培品種徐州142(XZ142)的無絨無絮突變體,本研究以XZ142(♀)和XZ142w(♂)構(gòu)建的一個(gè)451個(gè)單株的F2群體為材料,用SSR和SNP分子標(biāo)記的方法定位
2、XZ142w突變體的長纖維控制基因li3和短絨控制基因n2。根據(jù)XZ142和XZ142w的胚珠轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)(-3和0 DPA)開發(fā)設(shè)計(jì)定位所用的SNP分子標(biāo)記。使用高分辨率熔解曲線(HRM)技術(shù)檢測SNP標(biāo)記,并將該技術(shù)用于親本和后代的基因分型,分型結(jié)果用于li3和n2基因的定位。目前主要結(jié)果有:
1、利用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)從4000對SSR引物中篩選到了152對親本之間有多態(tài)性,并將li3和n2均錨定在了26號染色體(
3、Chr26)上。根據(jù)染色體錨定結(jié)果,結(jié)合轉(zhuǎn)錄組中有SNP且差異表達(dá)的基因開發(fā)設(shè)計(jì)SNP引物,經(jīng)HRM技術(shù)檢測獲得9對在兩材料之間有多態(tài)性的SNP引物。多態(tài)性的SSR和SNP標(biāo)記用于F2群體,利用JoinMap4.0軟件構(gòu)建了一個(gè)106.5 cM的連鎖圖譜(LOD=6)。在連鎖圖譜上,長纖維基因li3位于SSR標(biāo)記SWU17492和SWU17386之間,遺傳距離分為2.7 cM和11.6 cM;短絨基因等位基因n2位于SNP標(biāo)記ICR20
4、158和SSR標(biāo)記ICR36274之間,遺傳距離分別5.3 cM和13.8 cM。通過比較測序的染色體物理圖譜發(fā)現(xiàn),連鎖標(biāo)記在遺傳圖譜和物理圖譜的位置大多一致,說明了定位結(jié)果的可靠性。
2、本研究利用HRM技術(shù)檢測XZ142和XZ142w之間的SNP,成功區(qū)分親本之間的SNP差異。并將該技術(shù)用于親本和F2后代的基因分型,最后將基因分型結(jié)果結(jié)合SSR標(biāo)記用于基因定位。使用HRM技術(shù)的同時(shí)對LightCycler480熒光定量PC
5、R儀檢測過程進(jìn)行了一定的改進(jìn),即將PCR擴(kuò)增和熔解曲線過程分開進(jìn)行。檢測結(jié)果表明操作的改進(jìn)不僅保持準(zhǔn)確的檢測效果,又能縮短熔解曲線獲得時(shí)間,從而可以提高檢測效率。
本研究通過構(gòu)建F2群體和分子標(biāo)記定位,獲得了XZ142w長纖維控制基因li3和短絨等位基因n2的連鎖標(biāo)記和遺傳區(qū)間。另外該研究也成功將HRM技術(shù)用于棉花SNP的檢測和后代的基因分型,并將分型結(jié)果用于相關(guān)基因的定位。本文研究結(jié)果為進(jìn)一步的精細(xì)定位和基因克隆奠定基礎(chǔ),對
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