氧化脂蛋白（a）檢測(cè)及臨床應(yīng)用研究.pdf

1、高脂蛋白(a)[Lp(a)]作為動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，As)性心、腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素已得到公認(rèn)，氧化Lp(a)[ox-Lp(a)]可導(dǎo)致巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，干擾纖溶系統(tǒng)正常功能的發(fā)揮，促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放，加速As進(jìn)程。 目的：(1)人血清中ox-Lp(a)自身抗體提取和特性分析。(2)分別采用ox-Lp(a)自身抗體、氧化LDL(ox-LDL)多克隆抗體，酶標(biāo)抗載脂蛋白(a)[apo(a)]為檢

2、測(cè)抗體的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(ELISA)測(cè)定ox-Lp(a)水平。(3)探討ox-Lp(a)水平在動(dòng)脈粥樣硬化(As)性心腦血管疾病中的變化及其機(jī)制，準(zhǔn)確評(píng)價(jià)其臨床價(jià)值。(4)對(duì)Lp(a)進(jìn)行不同程度氧化、修飾，檢測(cè)Lp(a)氧化位點(diǎn)等特性的改變。 方法：(1)采用溴化氰活化的sepharose 4B交聯(lián)ox-Lp(a)制備免疫吸附層析柱，從正常人血清中提取抗ox-Lp(a)自身抗體。(2)分別建立以抗ox-Lp(a)的自身抗體

3、、抗ox-LDL多克隆抗體為包被抗體，酶標(biāo)抗載脂蛋白(a)[apo(a)]為檢測(cè)抗體的ox-Lp(a)ELISA檢測(cè)法。(3)采用ELISA法測(cè)定139例冠心病組患者OX-Lp(a)水平，分析其與冠心病之間的關(guān)系。(4)采用不同濃度的Cu2+和丙二醛(MDA)分別對(duì)Lp(a)進(jìn)行氧化、修飾，觀察不同時(shí)相硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)(TBARS)、共軛雙烯(CD)和氧化位點(diǎn)等特性的改變。 結(jié)果：(1)所分析的8份正常人血清中均存在抗ox-

4、Lp(a)自身抗體，與ox-Lp(a)、ox-LDL均具有良好的反應(yīng)性；再經(jīng)親和層析除出抗ox-LDL自身抗體后，2份標(biāo)本同ox-Lp(a)仍具有較高的反應(yīng)性。(2)建立的兩種ELISA檢測(cè)法均同ox-Lp(a)具極強(qiáng)的免疫反應(yīng)性，而同天然、MDA修飾的Lp(a)具極低的免疫反應(yīng)能力。同對(duì)照組相比，兩種ELISA法間結(jié)果高度相關(guān)(r=0.78，P＜0.0001)。(3)本組冠心病患者血漿Lp(a)水平顯著升高[(279.6±162.7)

5、mg/L對(duì)(206.3±126.4)mg/L，P＜0.0001]；ox-Lp(a)水平亦明顯增加(P＜0.0001)，采用自身抗體和抗ox-LDL抗體建立的ELISA法測(cè)定結(jié)果分別為：(24.3±33.4)μg/ml對(duì)(8.4±9.3)μg/ml和(13.0±13.8)μg/ml對(duì)(7.3±9.7)μg/ml。Ox-Lp(a)水平與冠心病病變程度密切相關(guān)，雙支血管病變組患者TC水平高于單支血管病變組(p＜0.01)；多支血管病變組患者o

6、x-Lp(a)水平明顯高于雙支血管病變組和單支血管病變組(p＜0.01)。(4)氧化、修飾引起Lp(a)TBARS值、CD值及ox-Lp(a)水平發(fā)生改變，三者水平先逐漸增加達(dá)到峰值，隨后進(jìn)入降解階段；天然Lp(a)水平與氧化時(shí)間相關(guān)(r=-0.437，p=0.002)；TC、TG的水平隨Cu2+和MDA的濃度的增大而發(fā)生變化。 結(jié)論：提取的人血清ox-Lp(a)自身抗體可識(shí)別apo(a)和apoB氧化位點(diǎn)，采用自身抗體建立的o