HCV HVR1模擬肽誘導(dǎo)小鼠樹突狀細(xì)胞免疫應(yīng)答及機(jī)制的初步研究.pdf

1、DC是目前已知的功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞，具有刺激初始T細(xì)胞增殖的獨(dú)特功能。DC分為髓樣DC(myeloid-DC，mDC)和漿細(xì)胞樣DC(plasmacytoid-DC，pDC)兩大亞群，分別由骨髓CD34+干細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞等在粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage clony- stimulating factor， GM-CSF)的誘導(dǎo)下分化而來?；贒C的重要功能和在機(jī)體特異性

2、免疫中居于的關(guān)鍵地位，本課題以BALB/c小鼠為研究對(duì)象，對(duì)7肽誘導(dǎo)小鼠DC細(xì)胞免疫應(yīng)答模式及其機(jī)制進(jìn)行了初步研究。課題分為三部分。
　　 (一)小鼠骨髓來源DC細(xì)胞培養(yǎng)
　　 在本研究中，我們首先對(duì)小鼠骨髓來源的DC進(jìn)行制備，主要描述了小鼠的骨髓細(xì)胞作為DC的前體細(xì)胞的采集、單核細(xì)胞分化為DC、表型評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示：此方法培養(yǎng)的細(xì)胞其表面CDllc的表達(dá)率超過80％，具有典型的DC形態(tài)。結(jié)論：利用此法能在體外培養(yǎng)出大量的

3、未成熟DC，為研究模擬肽誘導(dǎo)小鼠DC細(xì)胞免疫應(yīng)答機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
　　 (二)模擬肽誘導(dǎo)小鼠DC細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究
　　 經(jīng)7肽免疫10天的小鼠，取脾細(xì)胞，分選CD4+T及CD+8T細(xì)胞與經(jīng)過7P負(fù)載并成熟DC細(xì)胞共孵育24小時(shí)，收集上清，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)方法檢測(cè)上清細(xì)胞因子。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組中CD8+T上清中IFN-γ、TNF-α、IL-10及IL-6較對(duì)照組有所升高，CD4+T上清中TNF-α降低；IL-5、IL-2

4、及INF-r均升高，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：7肽能誘導(dǎo)以CD8+T及Th1細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫。
　　 (三)模擬肽誘導(dǎo)免疫應(yīng)答機(jī)制的初步研究
　　 為了解體內(nèi)7P免疫激活及調(diào)節(jié)途徑，應(yīng)用基因組表達(dá)譜芯片、RT-PCR以及Western blot等方法檢測(cè)了免疫后小鼠脾細(xì)胞mRNA的表達(dá)水平以及蛋白的表達(dá)情況。在基因組表達(dá)譜芯片中：實(shí)驗(yàn)組GPIBB，HP，F(xiàn)13A1，F(xiàn)2RL2，GP5，F(xiàn)10，4VWF表達(dá)量增多，基因TN

5、FRSF13C，SYK，TCRB-V13，F(xiàn)GD4，IGH-6，PDE4B，SOCS3，JAK1，TNFSF13B，CD4表達(dá)量則下降。RT-PCR結(jié)果提示：試驗(yàn)組syk，Jak和Tnfsfl3b的mRNA表達(dá)水平降低，IFN-γ、IL-2和IL-10的mRNA表達(dá)水平升高。Western Blot提示：試驗(yàn)組SYK蛋白表達(dá)降低，而IFN-γ蛋白表達(dá)增高。結(jié)論：7肽可能誘導(dǎo)以CD8+T及Th1細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫，并且通過如SYK、Jak