可控性樹突狀細胞活疫苗誘導抗卵巢癌免疫應答的實驗研究.pdf

1、9 5 5 0 2 ：i後旦大學學校代碼1 0 2 4 6學 號：0 3 1 1 0 8 1 9 1博士學位論文誘導抗卵巢癌免疫應答的實驗研究院專姓系：業(yè)：名：指導教師：婦產(chǎn)科醫(yī)院婦產(chǎn)科學康 玉徐從劍教授完成日期： 蘭Q Q 墮生! 旦! 旦復旦大學博士學位論文 可控性樹突狀細胞活疫苗誘導抗卵巢癌免疫應答的實驗研究 中文摘要第二部分 可控性樹突狀細胞活疫苗誘導抗卵巢癌免疫保護和免疫治療作用目的：研究可控性D C 活疫苗誘導抗卵巢癌免疫保

2、護和免疫治療作用。方法：1 ．乳酸脫氫酶釋放法檢測經(jīng)過活疫苗免疫的大鼠脾細胞毒性T 淋巴細胞( C T L ) 對N u T u 一1 9 細胞的殺傷作用。2 ．在體內(nèi)免疫保護實驗中，實驗大鼠分為活疫苗組、活疫苗+ 羥甲基無環(huán)鳥苷( 6 C V ) 組、死疫苗組、單用G C V 組矛n P B S 對照組。各組大鼠分別經(jīng)二次免疫后，給予N u T u 一1 9 細胞攻擊。一周后，活疫苗+ 6 C V 組和單用6 C V 組再予腹腔注射6

3、 C V 。N u T u 一1 9 細胞攻擊后9 0 天終止實驗。觀察腫瘤出現(xiàn)時間、腫瘤大小。分別計算實驗各組抑瘤率、病理形態(tài)學檢測、流式細胞儀檢測各腫瘤組織的細胞凋亡情況。3 ．在體內(nèi)的免疫治療實驗中，每只大鼠先皮下接種N u T u 一1 9細胞，一周后將荷瘤大鼠分組，分別給予二次活疫苗、活疫苗+ 6 C V 、死疫苗、單用6 C V 或P B S 處理。接種N u T u 一1 9 細胞后9 0 天終止實驗。觀察腫瘤形成及腫瘤大

4、小，取瘤稱重并作光鏡及流式細胞儀檢測。結(jié)果：1 ．經(jīng)活疫苗免疫的大鼠脾C T L 對N u T u 一1 9 細胞的殺傷活性L k , P B S 對照組顯著增高( P < O ．0 1 ) ，并強于經(jīng)死疫苗免疫者∽< 0 ．0 5 ) 。2 ．免疫保護實驗結(jié)果表明，與P B S 對照組相比，經(jīng)活疫苗免疫后大鼠的腫瘤發(fā)生率降低；成瘤時間延遲；腫瘤體積縮小( P < O ．0 1 ) ，其作用強于死疫苗組( P <

5、 O ．0 5 ) ?；钜呙缃M抑瘤率可達8 3 ．0 2 ％，而死疫苗組僅2 5 ．4 7 ％，差異有顯著性意義( P < O ．0 1 ) 。活疫苗組腫瘤組織有大片壞死灶及大量淋巴細胞浸潤；腫瘤組織的凋亡率明顯高于對照組( P < O ．0 5 ) 。3 ．免疫治療實驗結(jié)果表明，與P B S 對照組相比，活疫苗治療組大鼠的平均腫瘤體積明顯縮小( P < O ．0 1 ) 。活疫苗組抑瘤率可達8 6 ．2 4 ％，而死

6、疫苗組僅3 4 ．3 9 ％，差異有顯著性意義( P < O ．0 1 ) ?；钜呙缃M腫瘤組織出現(xiàn)大片狀壞死樣結(jié)構(gòu)及團簇樣淋巴細胞浸潤；腫瘤組織的凋亡率明顯高于對照組( P < O ．0 5 ) 。結(jié)論：與死疫苗相比，卵巢癌／D C 活疫苗能顯著提高大鼠C T L 殺傷活性，誘導更強的抗卵巢癌免疫保護和免疫治療作用。第三部分可控性樹突狀細胞活疫苗的安全性研究目的：研究可控性D c 活疫苗在體內(nèi)外被滅活的可行性。方法：1 ．在

7、體外實驗中，以M T T 法檢測6 C V 對活疫苗的殺傷作用；以流式細胞儀和H o e c h s t 染色法檢測6 C V 作用7 天后活疫苗的凋亡現(xiàn)象。2 ．在體內(nèi)實驗中，大鼠經(jīng)足墊皮下接種活疫苗后分為兩組：活疫苗+ 6 C V 組大鼠再予6 C V 腹腔注射7 天；活疫苗+ 生理鹽水組作為對照組。接種活疫苗后觀察9 0 天，記錄注射部位有無腫瘤形成及各臟器的腫瘤轉(zhuǎn)移情況。3 ．將活疫苗以熒光染料標記后進行大鼠體內(nèi)示蹤，一組大鼠再