增強(qiáng)口蹄疫疫苗免疫反應(yīng)及其調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、動(dòng)物烈性傳染性疾病是威脅動(dòng)物及人類生存的一類傳染病，一旦爆發(fā)將會(huì)造成災(zāi)難性的后果。疫苗接種是預(yù)防此類傳染病的有效方法。傳統(tǒng)的滅活疫苗在動(dòng)物傳染性疾病的防治中發(fā)揮了重要的作用，但其在制作方法和應(yīng)用效果上還有不足之處。其中之一是現(xiàn)行使用的礦物油佐劑有一定的副作用和較低的細(xì)胞免疫效果。因此提高疫苗免疫效果的重要方法之一是對(duì)佐劑進(jìn)行改良。左旋咪唑(LMS)最初應(yīng)用于去除動(dòng)物體內(nèi)寄生蟲的化學(xué)藥物。許多研究證明LMS是一種良好的免疫增強(qiáng)劑，它能使受

2、抑制的吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞功能恢復(fù)正常，而且LMS還應(yīng)用于癌癥的免疫治療上。本實(shí)驗(yàn)室也證實(shí)DIS作為口蹄疫DNA疫苗的佐劑，不但產(chǎn)生了提高口蹄疫的體液免疫反應(yīng)，更重要的是能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的細(xì)胞免疫反應(yīng)。因此為了研究LMS作為口蹄疫滅活疫苗的佐劑效果，并進(jìn)一步探討LMS作為佐劑增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用機(jī)理。本研究利用不同濃度的LMS與口蹄疫滅活抗原146S混合免疫BAI-B/c和C57 BL/6小鼠，檢測(cè)產(chǎn)生的體液和細(xì)胞免疫水平。結(jié)果表明在免

3、疫后42天，2％的LMS誘導(dǎo)產(chǎn)生了較高水平的IgG：而0.5％的LMS刺激產(chǎn)生了較強(qiáng)的T細(xì)胞增殖反應(yīng)。為進(jìn)一步探討LMS作為佐劑增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用機(jī)理，本研究還進(jìn)一步對(duì)在LMS影響下，免疫系統(tǒng)對(duì)抗原提呈過程中起重要作用的MHC，共刺激分子，及負(fù)反饋分子SOCS1和SOCS3進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明LMS可能是通過提高M(jìn)HC分子和共刺激分子在抗原提呈細(xì)胞(APC)上的表達(dá)，進(jìn)而提高了免疫反應(yīng)水平。同時(shí)還證明礦物油佐劑造成低水平細(xì)胞免疫能力可能是

4、由于上調(diào)了負(fù)反饋分子SOCS1和SOCS3的表達(dá)，從而抑制了其細(xì)胞免疫水平。以上研究結(jié)果表明LMS可以作為滅活疫苗的佐劑增強(qiáng)其免疫效果。 DNA疫苗能產(chǎn)生體液免疫反應(yīng)，尤其是能夠有產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)，在許多疫苗研究中已經(jīng)取得很大進(jìn)步，但在大動(dòng)物和人體中的免疫效力尚不理想。而傳統(tǒng)的滅活疫苗能夠誘發(fā)產(chǎn)生較高的抗體水平，但細(xì)胞免疫水平較弱。因此我們?cè)O(shè)想將口蹄疫DNA疫苗與蛋白疫苗混合免疫小鼠，以期利用各自優(yōu)勢(shì)免疫方案提高整體免疫水

5、平。結(jié)果出乎我們的預(yù)料，結(jié)果發(fā)現(xiàn)混合免疫小鼠產(chǎn)生的抗體水平很高，但T細(xì)胞增殖反應(yīng)卻受到抑制，IFN-γ和IL-2表達(dá)水平也相應(yīng)的降低。為進(jìn)一步驗(yàn)證這種免疫抑制現(xiàn)象的普遍性，本研究分別利用豬瘟病毒(CFSV)抗原和人乙肝病毒S抗原(HBsAg)為蛋白疫苗與兩種相應(yīng)的DNA疫苗混合免疫，同樣產(chǎn)生了Th1 T細(xì)胞免疫抑制。結(jié)果表明DNA與蛋白疫苗混合免疫產(chǎn)生的抑制T細(xì)胞活性是一種普遍存在的的現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明將DNA疫苗與蛋白疫苗分開小鼠左

6、右腿注射，仍會(huì)抑制T細(xì)胞活性，表明只要DNA疫苗與蛋白疫苗同時(shí)出現(xiàn)與小鼠體內(nèi)，就會(huì)產(chǎn)生T細(xì)胞抑制；而當(dāng)DNA疫苗與非同源編碼的蛋白疫苗共同免疫時(shí)，則不會(huì)產(chǎn)生此種免疫抑制結(jié)果，證實(shí)這種抑制只有當(dāng)DNA疫苗與其同源編碼的蛋白疫苗共同免疫才會(huì)產(chǎn)生，所以具有抗原特異性。 為進(jìn)一步研究這種免疫抑制現(xiàn)象的產(chǎn)生機(jī)制，將免疫后小鼠的T細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)表明轉(zhuǎn)移后的T細(xì)胞仍然具有抑制作用，不但能在體內(nèi)抑制抗原特異性的

7、細(xì)胞免疫反應(yīng)，還能在體外以非抗原特異性的方式發(fā)揮抑制作用。為證明這種抑制作用與體內(nèi)存在的天然Treg細(xì)胞相關(guān)性及其T細(xì)胞亞型，本研究利用純化得到CD4+，CD8+，CD4+CD25-的T細(xì)胞亞群，進(jìn)行T細(xì)胞增殖反應(yīng)，T細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移和MLR實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明DNA疫苗與滅活疫苗聯(lián)合免疫誘導(dǎo)的免疫抑制現(xiàn)象是由CD4+CD25-1細(xì)胞亞群產(chǎn)生，它們并具有Foxp3和IFN-γ高表達(dá)特性。說明DNA疫苗與滅活疫苗聯(lián)合免疫誘導(dǎo)了一類新型的CD4+CD

8、25-Treg細(xì)胞。此類細(xì)胞如何發(fā)揮免疫抑制功能仍然在研究中?？偠灾?，本研究證實(shí)了LMS是一種良好的病毒滅活疫苗免疫增強(qiáng)劑，也為其成為滅活疫苗佐劑應(yīng)用研究提供了理論依據(jù)．本研究還發(fā)現(xiàn)了DNA疫苗與滅活疫苗聯(lián)合免疫產(chǎn)生了T細(xì)胞免疫抑制現(xiàn)象，其抑制作用是由一群新的抗原特異性Treg細(xì)胞(CD4+CD25-T細(xì)胞)產(chǎn)生的。此類抗原特異性Treg細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)為Treg細(xì)胞家族增加了新的成員，并為誘導(dǎo)產(chǎn)生Treg細(xì)胞提供了一種簡(jiǎn)單有效的方法。為探