缺氧-藥物后處理對(duì)大鼠心肌細(xì)胞ATP敏感性鉀通道亞基的影響.pdf

1、目的：建立成年大鼠心室肌細(xì)胞分離和培養(yǎng)模型，以成年鼠心肌細(xì)胞為觀察對(duì)象，探討缺血后處理（Ischemic postconditiong，IPTC）與ATP敏感性鉀通道開(kāi)放劑吡那地爾（pinacidil）藥物后處理對(duì)成年鼠心室肌細(xì)胞ATP敏感鉀通道亞基表達(dá)的影響。
　　 方法：選擇16-20周的成年SD大鼠，應(yīng)用Langendorff離體心臟灌注裝置，分離培養(yǎng)心肌細(xì)胞。將大鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分為正常組（Nor），對(duì)照組（con），缺血

2、后處理組（IPTC），吡那地爾（Pina）后處理組，格列本脲（glibenclamide，Gly）拮抗IPTC組（Gly+IPTC），格列本脲拮抗吡那地爾組（Gly+Pina）。分離后的心肌細(xì)胞培養(yǎng)18小時(shí)，除Nor組持續(xù)培養(yǎng)外，其余各組均缺氧45min，復(fù)氧60min。Con缺氧45min，復(fù)氧60min；IPTC組缺氧45min后即刻復(fù)氧-缺氧循環(huán)3次各3min，繼續(xù)復(fù)氧60min；Pina組缺氧45min后于培養(yǎng)基中加入吡那地爾（

3、100μM）處理5min，再?gòu)?fù)氧60min；Gly+IPTC組缺氧45min后格列本脲（10μM）處理5min，再行復(fù)氧-缺氧后處理，繼續(xù)復(fù)氧60min；Gly+Pina組缺氧45min后格列本脲（10μM）處理5min，再行吡那地爾（100μM）后處理5min，繼續(xù)復(fù)氧60min。心肌細(xì)胞經(jīng)以上不同條件處理后，提取RNA，RT-PCR檢測(cè)ATP敏感鉀通道亞基基因變化情況；其它條件不變，心肌細(xì)胞復(fù)氧180min后，提取蛋白質(zhì)，Weste

4、rn-blot檢測(cè)ATP敏感鉀通道亞基蛋白變化情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.分離的成年大鼠心肌細(xì)胞活性比例約80％-90％，顯微鏡下觀察細(xì)胞呈桿狀，橫紋清晰，有間斷不規(guī)則的自主收縮。
　　 2.ATP敏感鉀通道亞基基因表達(dá)情況 Kir6.1：Con組表達(dá)量高于Nor組；IPTC組和Pina組表達(dá)明顯高于Con組，且IPTC組較Pina組表達(dá)量升高；Gly+IPTC組較IPTC組表達(dá)量降低，同時(shí)Gly+Pina組

5、較Pina組表達(dá)量也降低。SUR1：Con組表達(dá)量低于Nor組；IPTC組和Pina組表達(dá)明顯低于Con組，IPTC組較Pina組表達(dá)量無(wú)明顯變化；Gly+IPTC組較IPTC組表達(dá)量升高，同時(shí)Gly+Pina組較Pina組表達(dá)量也升高。Kir6.2與SUR2變化情況與Kir6.1相同。
　　 3.ATP敏感鉀通道亞基蛋白表達(dá)情況Kir6.1：Con組表達(dá)量高于Nor組（P<0.05）；IPTC組和Pina組表達(dá)明顯高于Con組

6、（p<0.05），IPTC組較Pina組表達(dá)量明顯升高（P<0.05）；Gly+IPTC組較IPTC組表達(dá)量降低（p<0.05），同時(shí)Gly+Pina組較Pina組表達(dá)量也降低（p<0.05）.Kir6.2與SUR2變化情況與Kir6.1相同.SUR1無(wú)特異性表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1.缺氧后處理能顯著提高ATP敏感鉀通道亞基Kir6.1、Kir6.2和SUR2的表達(dá)，能夠降低SUR1的mRNA表達(dá)，這些效應(yīng)能被AT