Th1-Th2細胞炎性因子在大鼠潰瘍性結(jié)腸炎治療模型中的表達研究.pdf

1、目的:潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)，又稱非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，是一種原因不明的，以腹痛、腹瀉、黏液膿血便、里急后重為主要臨床表現(xiàn)的直腸和結(jié)腸炎性疾病。其病因尚未完全明了，目前認為，可能是免疫、遺傳、感染、精神等多種因素綜合作用所致。UC的發(fā)病涉及系統(tǒng)免疫功能紊亂，與各類免疫細胞表達失衡關(guān)系密切?，F(xiàn)代研究表明，作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分的CD4+T亞型Th1/Th2細胞在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中起重要作用。其分化控

2、制調(diào)節(jié)的炎性細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10表達失衡可能是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的主要機制之一。本實驗旨在建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，研究中藥結(jié)腸寧灌腸劑1（九芝堂醫(yī)藥貿(mào)易有限公司）對潰結(jié)大鼠治療前后血清及腸粘膜組織中Th1/Th2細胞型炎性因子IL-2、IFN-γ、 IL-4、IL-10的變化，以分析Th1/Th2細胞的表達平衡及失衡，初步探討中藥結(jié)腸寧防治潰瘍性結(jié)腸炎可能的作用機制及途徑。
　　 方法:40只SD大

3、鼠分為A組正?？瞻捉M，B組模型對照組，C組柳氮磺嘧啶治療組（SASP治療組），D組結(jié)腸寧治療組，每組10只。除正?？瞻捉M大鼠每日自由飲用消毒蒸餾水外，其余各組大鼠每日自由飲用蒸餾水配制的4％ DSS（葡聚糖硫酸鈉），連續(xù)7天，建立大鼠潰結(jié)模型。7天后均改為飲用蒸餾水及常規(guī)飲食。從造模第4天開始，SASP治療組及結(jié)腸寧治療組分別以配置的SASP溶液及結(jié)腸寧溶液灌腸(10 ml/kg)，每次倒置保留10分鐘，1次/天，連續(xù)7天。每天對各組大

4、鼠進行疾病活動指數(shù)評分(DAI)?？傔M程第11天，處死所有大鼠，對結(jié)直腸進行組織損傷學(xué)評分。運用ELISA及Real-timeRT PCR分別檢測血清及腸黏膜組織中細胞因子IL-2、IFN-γ、 IL-4、IL-10表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.一般情況及DAI評分:A組正?？瞻捉M10只大鼠在總實驗進程（共10天）中精神狀態(tài)良好、食欲佳、喜動靈活、無腹瀉血便、體重增加明顯。余下B組模型對照組，C組SASP治療組，D

5、組結(jié)腸寧治療組大鼠在飲用4％ DSS后，逐漸出現(xiàn)不同程度的懶動、拱背、厭食，并出現(xiàn)腹瀉、血便、體重減輕，DAI評分與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01）。第4天開始兩治療組分別開始用SASP及結(jié)腸寧灌腸溶液灌腸治療，正?？瞻捉M及模型對照組僅用0.9％生理鹽水灌腸。治療3天后（總進程第7天），兩治療組的DAI評分較模型對照組開始出現(xiàn)差異(P＜0.05），升高程度較B組減緩，組內(nèi)大鼠腹瀉便血、體重減輕等癥狀較輕。治療7天（總進程第10天）

6、，兩治療組大鼠較B組病情明顯好轉(zhuǎn)，精神狀態(tài)較好，體重增長，食欲增加，活動度增加，未見粘液血便，偶有松軟便，DAI評分較B組明顯降低，存在顯著性差異(P＜0.05），且結(jié)腸寧治療組癥狀改善優(yōu)于SASP治療組，但兩者間尚無明顯差異（P＞0.05）。
　　 2.組織損傷學(xué)情況:肉眼觀察:B組模型對照組大鼠結(jié)直腸腸壁可見明顯的充血和水腫，沿腸粘膜縱行剪開可見腸粘膜炎癥明顯，表面凹凸不平，增厚水腫，充血并可見炎性滲出，病變主要在遠端結(jié)直腸

7、。C組SASP治療組及D組結(jié)腸寧治療組較B組腸粘膜炎癥減輕，水腫不明顯，輕微滲出。光鏡下病理形態(tài):B組模型對照組炎癥反應(yīng)明顯，腸黏膜上皮細胞損傷脫落呈間斷性大面積潰瘍，不同程度腺體結(jié)構(gòu)消失，大量炎癥細胞浸潤，黏膜下淋巴細胞增生并有淋巴濾泡形成，肌層不完整，組織學(xué)評分明顯高于A正常空白組、C組SASP治療組、D組結(jié)腸寧治療組（P＜0.05）。SASP治療組腸粘膜腺體排列仍不規(guī)則，仍可見散在潰瘍，炎性細胞浸潤，肌層完整。結(jié)腸寧治療組結(jié)腸病變

8、有明顯改善，腺體排列較為規(guī)則，各層均較完整，僅有少量小面積潰瘍。
　　 3.各組血清中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的表達:B組模型對照組大鼠血清IFN-γ含量明顯升高，IL-4、IL-10含量明顯下降，與正?？瞻捉M比較有顯著性差異(P＜0.05）。C組SASP治療組和D組結(jié)腸寧治療組IFN-γ含量與B組相比均有下降，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05); IL-4含量與B組相比均有升高，僅結(jié)腸寧治療組有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0

9、.05); IL-10含量兩治療組較B組均有升高，且有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05）。IL-2在正常組及治療前后均無明顯差異（P＞0.05）。兩治療組間比較無明顯差異(P＞0.05）。
　　 4.各組結(jié)腸組織中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的表達:IL-2在正?？瞻捉M、模型對照組及兩治療組中均無明顯差異(P＞0.05）。IFN-γ在B組模型對照組中顯著上調(diào)，與正常組比較具有顯著差異(P＜0.05)，而兩治療組IFN-γ均

10、有所下降，僅結(jié)腸寧治療組具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。IL-4在B組模型對照組中表達上調(diào)，與正常空白組比較有差異性(P＜0.05），但相較于兩治療組治療前后差異不大(P＞0.05）。IL-10在模型對照組中與正常組比較下調(diào)明顯，具有顯著性差異(P＜0.05)，而兩治療組經(jīng)過灌腸治療，IL-10的表達較模型組有所上升，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。兩治療組間比較無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:大鼠DSS UC模型中