腱組織提取物對(duì)大鼠脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和向肌腱細(xì)胞分化的影響.pdf

1、研究目的:
　　 探討腱組織提取物對(duì)ADSC增殖和向肌腱細(xì)胞方向分化的影響，從而為肌腱組織工程及其最終應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。
　　 研究方法:
　　 從3周齡SD大鼠腹股溝脂肪墊分離出脂肪組織，通過Ⅰ型膠原酶消化法分離干細(xì)胞，接種于含有胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中分離傳代。每日以倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況，MTT法繪制ADSC生長(zhǎng)曲線。經(jīng)鑒定后，取第三代ADSC分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組2組，利用腱組織提取物處理實(shí)

2、驗(yàn)組ADSC，Hank’s液處理對(duì)照組細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)觀察。采用MTT比色法進(jìn)行增殖活性比較，Ⅰ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)成肌腱分化情況以及RT-PCR檢測(cè)肌腱發(fā)育相關(guān)基因(CollagenⅠ、CollagenⅢ基因)的表達(dá)。
　　 研究結(jié)果:
　　 原代細(xì)胞接種4-6小時(shí)后即可見沉降貼壁，7-8天左右可見大量增殖，按一定方向性排列，呈漩渦狀或束狀，傳代后細(xì)胞增殖迅速，生長(zhǎng)穩(wěn)定。腱組織提取物誘導(dǎo)后，MTT實(shí)驗(yàn)顯示ADSC增