心之絡(luò)病“孫絡(luò)疏失”的中醫(yī)微觀病理特征研究.pdf

1、目的:應(yīng)用冠狀動(dòng)脈微血管缺血?jiǎng)游锬Ｐ?闡明冠狀動(dòng)脈微血管缺血的病理變化與心之絡(luò)病孫絡(luò)疏失病理類(lèi)型的密切相關(guān)性,揭示孫絡(luò)疏失發(fā)生、發(fā)展的病理特征。
　　方法:將心電圖正常的240只雄性 SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、造模30min組、造模1h組、造模6h組、造模12h組、造模24h組,每組40只。通過(guò)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支的方法造成急性心肌缺血模型(“孫絡(luò)疏失”模型),假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。造模成功后,各組分別于規(guī)定時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)或取材。每

2、組5只用于心電圖連續(xù)監(jiān)測(cè);每組10只用于心臟TTC染色、活體微循環(huán)觀測(cè)技術(shù)檢測(cè)心肌表面血流量變化;每組5只用于HE染色方法觀察心肌組織病理改變,透射電鏡技術(shù)觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化;每組10只用于放射免疫法檢測(cè)血漿內(nèi)皮素-1(ET-1)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1а(6-keto-PGF1а)、血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)、一氧化氮(NO)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平;每組5只用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)微血管密度(MVD)

3、、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、B細(xì)胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、TUNEL染色;每組5只用于qPCR法檢測(cè)iNOSmRNA、ET-1mRNA、ICAM-1mRNA、VCAM-1mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、心電圖:造模開(kāi)始 ST段進(jìn)行性抬高,后逐漸有所回落,部分大鼠回落至基線水平,病理性Q波自30min起一直存在。心電圖動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)過(guò)程中,部分大鼠短暫出現(xiàn)以房室傳導(dǎo)阻滯、室性早搏為主的心

4、率失常。
　　2、心臟TTC染色:造模開(kāi)始至1h大鼠心臟染色均呈紅色,未見(jiàn)白色;造模6h、12h、24h組大鼠左心室、心尖部及室間隔部分染色呈白色。
　　3、心臟表面血流量:自造模開(kāi)始大鼠心臟表面血流量明顯下降,至12h有所回升但仍低于假手術(shù)組,24h時(shí)血流量已回升至假手術(shù)組同一水平。
　　4、心肌組織形態(tài)學(xué)觀察:光鏡下觀察:30min及1h以炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和部分心肌細(xì)胞壞死為主要改變,6h炎性細(xì)胞浸潤(rùn)最明顯并伴有心肌細(xì)

5、胞壞死溶解改變,12h和24h以心肌組織內(nèi)增生改變?yōu)橹?且24h炎性細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯;電鏡下觀察:開(kāi)始僅見(jiàn)Z線和M線可見(jiàn)迂曲模糊,閏盤(pán)局灶性模糊,線粒體輕度腫脹等輕度病理變化,隨后出現(xiàn)心肌細(xì)胞水腫,肌原纖維灶性溶解等變化,進(jìn)一步加重出現(xiàn)心肌細(xì)胞壞死及血管間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,病變隨時(shí)間推移呈逐漸加重趨勢(shì),12h最為嚴(yán)重。
　　5、血漿舒縮因子含量:血漿6-keto-PGF1а水平顯著下降(P<0.01或P<0.05),于12h達(dá)到最低水

6、平;血漿TXB2水平顯著升高(P<0.01),而后明顯下降(P<0.05);血漿ANGⅡ在造模30min組、造模1h組顯著降低(P<0.01或P<0.05),而后回升至正常水平;血漿ET-1水平在造模1h組、造模6h組、造模12h組顯著升高(P<0.05),并于24h恢復(fù)正常;血漿NO水平于造模12h顯著升高(P<0.01);各個(gè)模型組血漿VEGF水平較假手術(shù)組均無(wú)明顯升高或降低。
　　6、新生與凋亡蛋白表達(dá):VEGF與CD34的

7、各模型組較假手術(shù)組均顯著升高(P<0.01);TUNEL法檢測(cè)凋亡陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)于各造模組顯著升高(P<0.01), Bcl-2及Bax值于各造模組均顯著升高(P<0.01)。
　　7、舒縮因子mRNA表達(dá):iNOSmRNA值顯著升高(P<0.01或P<0.05),造模30min組則無(wú)明顯差別; ET-1mRNA值于造模12h組、造模24h組顯著升高(P<0.01);ICAM-1mRNA值明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)

8、,其余各組較假手術(shù)組無(wú)顯著變化;ICAM-1mRNA值明顯升高(P<0.01)且非梗死區(qū)升高早于梗死區(qū); VCAM-1mRNA值顯著升高(P<0.01),且非梗死區(qū)升高明顯早于梗死區(qū)。
　　結(jié)論:
　　1、應(yīng)用冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎方法制作大鼠“孫絡(luò)疏失”模型證實(shí)可靠。
　　2、“孫絡(luò)疏失”模型造成心臟表面孫絡(luò)功能缺少和(或)數(shù)量減少,機(jī)體可通過(guò)代償調(diào)節(jié)恢復(fù)部分功能。
　　3、“孫絡(luò)疏失”造成心肌細(xì)胞炎性浸潤(rùn)、心肌纖