基質(zhì)金屬蛋白酶組織抵制劑-1對(duì)髓核細(xì)胞影響的初步研究.pdf

1、目的:
　　 體外培養(yǎng)人髓核細(xì)胞，使用不同濃度的基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1對(duì)髓核細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，觀察不同濃度的基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1干預(yù)下的體外髓核細(xì)胞生物學(xué)活性的影響，初步探討TIMP-1對(duì)椎間盤(pán)退變緩解或逆轉(zhuǎn)的作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)人髓核細(xì)胞10例，每例細(xì)胞傳代后共分6組，以不同濃度的基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑．1分別對(duì)傳代后的髓核細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，其中A組為對(duì)照組(即TIMP-1濃度為0ng/ml)，另5組加

2、入TIMP-1進(jìn)行干預(yù)，濃度分別為（1，10，20，40，80ng/ml），即B組、C組、D組、E組、F組。分別于干預(yù)后第2,4,6，8d采用WESTERN BLOTTING技術(shù)測(cè)定各組Ⅱ型膠原的定量表達(dá)。并于第6d對(duì)髓核細(xì)胞行甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)髓核細(xì)胞中蛋白聚糖的表達(dá)，第8d對(duì)髓核細(xì)胞行細(xì)胞免疫熒光染色法測(cè)定各組髓核細(xì)胞Ⅱ型膠原的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)甲苯胺藍(lán)染色顯示:細(xì)胞胞漿呈天藍(lán)色，系細(xì)胞內(nèi)蛋白聚糖被甲苯

3、胺藍(lán)深染，越靠近細(xì)胞核染色越深。隨TIMP-1濃度的增加，染色結(jié)果亦逐漸加深。于40ng/ml組染色最深。
　　 (2)細(xì)胞免疫熒光染色顯示:染色后于倒置熒光顯微鏡下顯示髓核細(xì)胞呈淡綠色或綠色熒光，熒光主要分布于細(xì)胞胞漿，而細(xì)胞核部分幾乎無(wú)熒光顯示。隨著TIMP-1濃度上升，熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)(P＜0.05)，且TIMP-1濃度為40ng/ml（E組）時(shí)熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值;F(80ng/ml)組與E組相比熒光強(qiáng)度明顯減弱。

4、　　 (3)WESTERNBLOTTING顯示:隨著TIMP-1作用時(shí)間的延長(zhǎng)Ⅱ型膠原的表達(dá)量逐漸上升(p＜0.001)。且隨著TIMP-1濃度上升，Ⅱ型膠原的含量也逐漸增加(P＜0.001)，TIMP-1濃度為40ng/ml（E組）時(shí)Ⅱ型膠原的含量達(dá)到最大值;F（80ng/ml）組與E組相比Ⅱ型膠原的含量明顯減少。
　　 結(jié)論:
　　 (1)TIMP-1干預(yù)后，髓核細(xì)胞中Ⅱ型膠原和蛋白聚糖的表達(dá)量明顯上升，提示其可有