貽貝足絲蛋白在牙齦上皮細(xì)胞粘結(jié)中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來越多的粘結(jié)相關(guān)材料被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)科學(xué)研究，并為臨床科學(xué)研究作出許多重要貢獻(xiàn)。然而，現(xiàn)有材料不僅在量或質(zhì)方面無法滿足日新月異的科學(xué)需求，且生物相容性差。因此，尋找一種行之有效、可大量生產(chǎn)、生物相容性好的粘結(jié)材料是目前亟需解決的問題。本研究根據(jù)貽貝能夠超強(qiáng)粘附在各種物體表面的特性，選用貽貝足絲蛋白（Musse l FootProtein, Mefp）及其粘附關(guān)鍵因子L-3,4-二羥基苯丙氨酸（L-

2、Dioxyphenylalanine, L-DOPA）進(jìn)行牙齦上皮細(xì)胞的粘附實(shí)驗(yàn)，同時(shí)對(duì)比幾種牙齦上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法，通過觀察細(xì)胞形態(tài)、繪制細(xì)胞生長曲線、測(cè)量細(xì)胞粘附量以及后續(xù)鈣離子濃度的測(cè)定評(píng)價(jià)Mefp和L-DOPA對(duì)牙齦上皮細(xì)胞的粘結(jié)作用，旨在尋找一種利于牙齦上皮細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)的方法，為臨床進(jìn)行牙齦上皮細(xì)胞的研究提供理論與技術(shù)支持。
　　方法：
　　1.分別采用單純Dispaes酶消化、單純玻片覆蓋組織塊法以及D

3、ispase酶消化聯(lián)合玻片覆蓋組織塊法培養(yǎng)Bea gle犬牙齦上皮細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞形態(tài)以及細(xì)胞生長時(shí)間，對(duì)比尋找最適細(xì)胞培養(yǎng)方法。
　　2.培養(yǎng)皿表面分別經(jīng)Mefp、L-DOPA、多聚賴氨酸(Poly-L-Lysine,PLL)、蒸餾水處理后接種一定量細(xì)胞，通過二瞇基苯基吲哚(4,6-Diamidino-2-Phe nylindo le, DAPI)染色計(jì)數(shù)計(jì)算細(xì)胞粘附量；酶標(biāo)儀測(cè)量光密度值(Optical Density, O

4、D)，繪制細(xì)胞生長曲線；掃描電子顯微鏡(Scanning Electron Microscopy, SEM)觀察細(xì)胞形態(tài)；細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度測(cè)定分析細(xì)胞增殖能力。并與空白組的作用進(jìn)行對(duì)比。
　　結(jié)果：
　　1.單純Dispase酶消化培養(yǎng)的牙齦上皮細(xì)胞貼壁少，培養(yǎng)成功率為0.0％。單純玻片覆蓋組織塊法培養(yǎng)細(xì)胞貼壁多，但成纖維細(xì)胞污染嚴(yán)重，培養(yǎng)成功率僅為30.5%。Dispase酶消化聯(lián)合玻片覆蓋組織塊法培養(yǎng)，短時(shí)間內(nèi)可獲得大量

5、牙齦上皮細(xì)胞，且不存在成纖維細(xì)胞污染，成功率可達(dá)91.6%。卡方檢驗(yàn)表明，各組細(xì)胞培養(yǎng)成功率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2. Mefp處理組與空白組相比，鏡下DAPⅠ染色細(xì)胞多，細(xì)胞呈扁圓形，棘明顯可見，48h細(xì)胞OD值高（P<0.05），呈典型S型生長，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度也較空白組高（P<0.05）；但與PLL處理組相比并無顯著差異（P>0.05）。L-DOPA處理組與空白組相比，鏡下 DAPⅠ染色細(xì)胞多，細(xì)胞呈扁圓形，偽