南方紅豆杉聚戊烯醇的分離純化與抗肝纖維化作用研究.pdf

1、中藥材資源的綜合利用對中藥行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展起著舉足輕重的作用。以有限的資源創(chuàng)造最大的價值，是保護(hù)中藥材資源的重要內(nèi)容。南方紅豆杉(TaxusChinensis var.mairei)是提取紫杉醇及其前體物質(zhì)的重要原料，由于針葉內(nèi)此類物質(zhì)含量低導(dǎo)致在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生大量的廢棄物。而南方紅豆杉針葉中及生產(chǎn)紫衫醇類化合物產(chǎn)生的廢棄物中富含聚戊烯醇類化合物，這為紅豆杉針葉資源的綜合利用開辟了新的途徑。本文對南方紅豆杉針葉中的聚戊烯醇化合物進(jìn)行了提

2、取分離、檢測、組分分析、含量變化、純化制備、結(jié)構(gòu)鑒定、以及抗肝纖維化活性等一系列研究，旨在為南方紅豆杉針葉資源的綜合利用和可持續(xù)發(fā)展提供理論依據(jù)，同時為其他中藥材資源的合理利用提供借鑒。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)采用索氏提取方法提取南方紅豆杉針葉中的聚戊烯醇類化合物，建立了聚戊烯醇的高效液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用等分析方法。HPLC具體分析參數(shù)為:XBridge RP C18(5μm，4.6mm×250mm);柱溫40℃;流速:1

3、.5 mL/min;進(jìn)樣量:10μL;紫外檢測波長:210 nm。流動相:甲醇(A)和異丙醇(B)，梯度洗脫:0-5min,40％ B;5-35 min,40％→75％ B;36 min,40％ B;50 min,40％B。結(jié)果表明，南方紅豆杉聚戊烯醇(Taxus polyprenols，TPs)共有11個同系物，并呈雙家族分布特征。
　　 (2)利用上述方法分析了不同月份南方紅豆杉當(dāng)年生針葉中TPs的含量結(jié)果表明，不同年齡植株

4、針葉中TPs的含量變化趨勢基本一致，即自生長初期開始積累至10～11月份達(dá)到最高(42.43 mg/g)，當(dāng)氣溫降低含量下降，待次年4月份又有回升趨勢，說明植株內(nèi)TPs可能與溫度存在一定的相關(guān)關(guān)系。不同年齡植株同一時間的TPs含量也有所差異，這可能是微環(huán)境不同所致。此外，初步研究表明光照強(qiáng)度對葉片內(nèi)TPs含量有一定影響，高光強(qiáng)有利于聚戊烯醇類物質(zhì)的積累。
　　 (3)對南方紅豆杉聚戊烯醇的規(guī)?；蛛x純化制備工藝進(jìn)行了系列研究，以

5、期為南方紅豆杉聚戊烯醇的廣泛應(yīng)用提供技術(shù)基礎(chǔ)。以索氏提取法制備TPs粗提物浸膏，通過丙酮冷析、水解、硅膠柱色譜等除雜方法對TPs的純化工藝進(jìn)行了探索，工藝如下:粗提物制備參數(shù):800 g南方紅豆杉針葉原料，80℃索氏提取12h。水解參數(shù):樣品，石油醚提取物100 g;轉(zhuǎn)速，240 rpm/min;水解液，5％NaOH甲醇溶液（含0.05％焦沒食子酸）;水解溫度60℃;水解時間:8h。丙酮冷析參數(shù):4～5℃，4h或室溫下24 h。硅膠柱層

6、析參數(shù):上樣量1∶30，洗脫液石油醚和乙酸乙酯(19∶1，v/v)，洗脫流速30 mL/min。根據(jù)以上參數(shù)制備聚戊烯醇得率約為0.6％。按照以上流程及工藝參數(shù)制備TPs(＞85％，HPLC測定)用作抗肝纖維化活性研究。此外，探索了HSCCC分離純化TPs的前期工藝條件，為聚戊烯醇分離純化提供新的方法。
　　 (4)在硅膠柱色譜分離純化的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用制備型HPLC分離純化聚戊烯醇單體，并借助UV、IR、1H NMR和13C

7、 NMR等常規(guī)波譜手段對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用分析結(jié)果表明TPs包含的同系物分別為polyprenol-14～polyprenol-24，結(jié)構(gòu)類型為樺木醇型聚戊烯醇。
　　 (5)動物實驗表明TPs具有一定的抗肝纖維化作用，能夠緩解由CCl4誘導(dǎo)SD大鼠的肝纖維化進(jìn)程。結(jié)果表明，TPs能夠顯著提高機(jī)體抗氧化能力、抑制肝星狀細(xì)胞活化、下調(diào)促肝纖維化細(xì)胞因子和保護(hù)肝細(xì)胞等，其抗纖維化作用可能通過抑制TGFβ/Samd2/3信