癲癇合并抑郁癥狀的谷氨酸能機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述：
　　第一部分 癲癇患者合并抑郁癥狀的臨床危險因素分析
　　目的:通過分析癲癇患者的社會狀況、癲癇發(fā)作相關(guān)因素和應(yīng)用的抗癲癇藥物等與抑郁癥狀發(fā)生之間的關(guān)系，以明確癲癇患者合并抑郁癥狀的臨床危險因素。
　　方法:對2010年10月至2012年3月來我院癲癇門診就診的癲癇患者登記基本資料并評估漢密爾頓抑郁量表（Hamilton Depression Rating Scale，HAMD）、國際

2、醫(yī)院癲癇發(fā)作程度量表(the National Hospital Seizure Severity Scale，NHS3)和匹茲堡睡眠質(zhì)量指數(shù)（Pittsberg Sleep Quality Index，PSQI）。
　　結(jié)果:共入選了116例患者。根據(jù)HAMD的評分標(biāo)準(zhǔn)分為以下三組:癲癇無抑郁癥狀組（HAMD評分0-6分）,癲癇伴輕度抑郁癥狀組（HAMD評分7-16分）和癲癇伴中度及以上抑郁癥狀組(HAMD評分≥17分）,結(jié)果顯

3、示，(status epilepticusSE)者的年齡、癲癇病程、有部分性發(fā)作和有癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus，SE)病史的患者比例均明顯高于無抑郁癥狀組。應(yīng)用托吡酯、氯硝西泮及2種及以上抗癲癇藥物的比例也在抑郁癥狀組明顯增多。相關(guān)性分析顯示，HAMD評分與癲癇患者年齡、病程均呈明顯的正相關(guān)。在有抑郁癥狀的癲癇患者中，HAMD評分與PSQI評分呈正相關(guān)Logistic回歸分析顯示年齡大于35歲、女性、有部分性發(fā)作

4、、有SE病史及應(yīng)用托吡酯是預(yù)測癲癇患者發(fā)生抑郁癥狀的危險因素。
　　結(jié)論:年齡大于35歲、女性、有部分性發(fā)作、有SE病史及應(yīng)用托吡酯可能成為預(yù)測癲癇患者是否出現(xiàn)抑郁癥狀的危險因素。
　　第二部分 癲癇合并抑郁癥狀患者海馬谷氨酸代謝產(chǎn)物的磁共振波譜分析
　　目的:本部分主要研究癲癇患者海馬中谷氨酸代謝產(chǎn)物水平是否與癲癇患者的抑郁癥狀存在相關(guān)性。
　　方法:滿足入選標(biāo)準(zhǔn)的癲癇患者均進行漢密爾頓抑郁量表(HAMD)、簡

5、明智能狀態(tài)檢查和國際醫(yī)院癲癇發(fā)作程度量表(NHS3)的評估。根據(jù)入選癲癇患者的HAMD評分將其分為三組。采用單體素磁共振波譜分析技術(shù)對所有癲癇患者的海馬區(qū)代謝產(chǎn)物進行分析，并獲得N-乙酰天冬氨酸、膽堿、肌酐和谷氨酸代謝產(chǎn)物(谷氨酸和谷氨酰胺，glutamate and glutamine，Glx)的波譜值。對三組患者海馬的NAA/Cr、Cho/Cr和Glx/Cr比率進行了比較。并采用Pearson相關(guān)性分析和多元線性回歸分析方法對所有癲

6、癇患者海馬的代謝產(chǎn)物比率和HAMD評分進行了分析。
　　結(jié)果:我們?nèi)脒x了50名癲癇患者，男女比例為28:22。年齡為17至53歲，平均33.38±11.01歲。所有的癲癇患者常規(guī)MRI檢查均為陰性。對海馬1H-MRS檢測的分析結(jié)果顯示，癲癇合并中度抑郁組患者右側(cè)海馬Glx/Cr的比率（0.41±0.19）較癲癇不伴抑郁組（0.32±0.08，P＜0.05）明顯增高。而且相關(guān)性分析顯示右側(cè)海馬Glx/Cr比率與HAMD評分具有明顯的

7、正相關(guān)(Pearson r=0.306，P=0.03)。多元線性回歸分析顯示右側(cè)海馬的Glx/Cr比率(B=21.130，P=0.02)是癲癇患者發(fā)生抑郁癥狀的獨立危險因素。
　　結(jié)論:右側(cè)海馬中Glx/Cr比率與癲癇患者的抑郁癥狀嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，并可能成為預(yù)測癲癇患者發(fā)生抑郁癥狀的危險因素。海馬中谷氨酸能系統(tǒng)功能損害可能參與癲癇與抑郁共病的發(fā)病機制。
　　第三部分 氯化鋰-匹魯卡品致大鼠慢性癲癇模型相關(guān)抑郁行為與慢性不可

8、預(yù)測溫和刺激抑郁癥模型的行為學(xué)比較和谷氨酸能作用的研究
　　目的:建立氯化鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)的大鼠慢性癲癇模型，設(shè)置正常大鼠作為正常對照組，通過行為學(xué)試驗篩選具有抑郁行為的模型大鼠，同時設(shè)置慢性不可預(yù)測溫和刺激抑郁癥模型作為陽性對照組，比較癲癇相關(guān)抑郁行為與原發(fā)性抑郁癥在行為學(xué)、病理形態(tài)和發(fā)病機制上的異同，并進一步探討谷氨酸能機制是否參與癲癇與抑郁癥共病的發(fā)病過程。
　　方法:(1)采用氯化鋰-匹魯卡品腹腔注射誘導(dǎo)大鼠癲癇持續(xù)

9、狀態(tài)，30min后腹腔注射安定終止癲癇發(fā)作，待1周的潛伏期后，采用錄像監(jiān)控大鼠的自發(fā)性癲癇發(fā)作，監(jiān)控時間共2周。同時采用每日不同的應(yīng)激方法建立CUMS抑郁癥模型，共刺激21天。所有的大鼠均進行兩種行為學(xué)測試:糖水偏好試驗和被動游泳試驗（。SCT試驗在造模前及造模后每周均進行1次，共4次。FST試驗于造模3周后觀察結(jié)束時進行1次。并根據(jù)FST試驗的不動行為時間(immobility time，IMT)將氯化鋰-匹魯卡品大鼠慢性癲癇模型分為

10、伴抑郁行為組和不伴抑郁行為組。(2)采用免疫熒光法檢測正常對照組（Control組）、氯化鋰-匹魯卡品大鼠慢性癲癇模型伴抑郁行為組（EWD組）、氯化鋰-匹魯卡品大鼠慢性癲癇模型不伴抑郁行為組(EWND組)和CUMS抑郁癥模型組（CUMS組）大鼠海馬及皮層中的神經(jīng)元核蛋白、膠質(zhì)纖維酸性蛋白、谷氨酸、γ-氨基丁酸和N-甲基-D-天門冬氨酸受體NR1、NR2A和NR2B亞單位及其磷酸化形式的表達情況，同時對以上檢測指標(biāo)在各組大鼠海馬CA1、C

11、A3、DG區(qū)和皮層中的分布進行了定量分析和比較;采用免疫印跡蛋白定量分析方法檢測以上四組大鼠海馬和額葉中NMDA受體NR1、NR2A和NR2B亞單位及其磷酸化水平的表達情況，并比較P-NR1/NR1、P-NR2A/NR2A和P-NR2B/NR2B表達比率在各組間的差異。(3)采用選擇性NMDA受體NR2B亞單位的阻斷劑ifenprodil給大鼠腹腔注射，并對Control組、Control+ifenprodil組、氯化鋰-匹魯卡品慢性癲

12、癇模型（Licl-pilocarpine model）組、Licl-Pilomodel+ifenprodil組大鼠在FST試驗中的抑郁行為進行了觀察和比較。
　　結(jié)果:氯化鋰-匹魯卡品大鼠慢性癲癇模型2周內(nèi)4級及以上（Racine分級）自發(fā)性癲癇發(fā)作次數(shù)為1-57次(n=23)，平均16.65±4.11次;SRS的平均潛伏期為11.70±3.36d; SRS的平均發(fā)作時間為19.28±7.60s。相關(guān)性分析顯示，2周內(nèi)大鼠4級及以

13、上的SRS頻率、潛伏期、發(fā)作持續(xù)時間與FST試驗的不動時間(IMT)等抑郁行為學(xué)指標(biāo)之間無明顯的相關(guān)性。根據(jù)FST試驗的IMT將氯化鋰-匹魯卡品大鼠慢性癲癇模型分為EWD組（IMT＞77.91s，n=8，占34.78％）和EWND組(≤77.91s，n=15)。自發(fā)性癲癇發(fā)作行為指標(biāo)（SRS頻率、潛伏期、發(fā)作持續(xù)時間）在EWD組和EWND組間相比較無明顯差異。抑郁行為學(xué)指標(biāo)在Control組、EWND組、EWD組和CUMS組間的比較顯示

14、，大鼠的IMT在EWD組和CUMS組中較EWND組和Control組均明顯延長，大鼠造模后的糖水消耗率和每100g體重糖水消耗量在EWD組和CUMS組的下降趨勢較Control組和EWND組更為明顯;同時大鼠的攀爬行為時間(climbing time，CMT)在EWND組較Control、EWD和CUMS三組均明顯延長，而體重增長率在CUMS組較Control、EWND和EWD三組均明顯減少。病理形態(tài)學(xué)研究顯示，大鼠海馬中NeuN陽性神

15、經(jīng)元數(shù)量在EWD組、EWND組和CUMS組均較Control組明顯減少，在EWD組、EWND組和CUMS組間的分布無明顯差異;大鼠海馬中GFAP陽性細胞數(shù)在EWD組和EWND組較Control組和CUMS組均明顯增多，在EWD組和EWND組間的分布也無明顯差異。此外，大鼠皮層和海馬中的GLU能神經(jīng)元數(shù)量在EWD組和CUMS組較EWND組明顯增多，GABA陽性細胞數(shù)在EWD組和EWND組均較Control組和CUMS組增高，但在EWD組和

16、EWND組之間無明顯差異。進一步研究顯示，大鼠皮層和海馬中NMDA受體P-NR1亞單位陽性神經(jīng)元比率在EWD組和CUMS組均較EWND組明顯增高，而NR2B亞單位陽性神經(jīng)元比率僅在EWD組較EWND組明顯增高。Western-blot免疫印跡分析結(jié)果也顯示大鼠海馬中的P-NR1/NR1和P-NR2B/NR2B表達比率在EWD組和CUMS組均較EWND組明顯增高，額葉中的P-NR2B/NR2B比率僅在EWD組較EWND組明顯增高。采用選擇

17、性NMDA受體NR2B亞單位的阻斷劑后氯化鋰-匹魯卡品大鼠慢性癲癇模型在FST試驗中的IMT較對照組明顯縮短。
　　結(jié)論:(1)本研究中氯化鋰-匹魯卡品大鼠慢性癲癇模型伴抑郁行為的發(fā)生率為34.8％，伴抑郁行為組與不伴抑郁行為組間SRS發(fā)作頻率、發(fā)作程度、海馬神經(jīng)元缺失和星形膠質(zhì)細胞增生程度均無明顯差異。(2)氯化鋰-匹魯卡品大鼠慢性癲癇模型和CUMS抑郁癥模型存在類似的快感缺乏和絕望感抑郁行為，同時也存在各自所不同的行為和生理指