肽酰基精氨酸脫亞氨酶4可能通過(guò)影響組蛋白甲基化水平參與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病.pdf

1、目的:探討類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中肽酰基精氨酸脫亞氨酶4(Peptidyl arginine Deaminase,PAD4)mRNA的表達(dá),了解PAD4mRNA表達(dá)的異常以及與抗CCP抗體及其它臨床指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性;同時(shí)檢測(cè)組蛋白H3R17不對(duì)稱的二甲基化,H4R3對(duì)稱的二甲基化及單甲基化的修飾水平,并分析RA患者PBMC中PAD4mRNA表達(dá)、H3R17/H4R3甲

2、基化水平及其臨床指標(biāo)的相關(guān)性。
　　方法:收集60例RA患者,40例正常對(duì)照組,分別抽取10ml抗凝外周血,淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞,Trizol法提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶反應(yīng)(real-time PCR)方法檢測(cè)患者組和對(duì)照組PBMCs中PAD4mRNA表達(dá)水平的差異,RA患者收集其相關(guān)臨床及實(shí)驗(yàn)室資料,包括：壓痛關(guān)節(jié)數(shù)(Tender joint count in 28 joints,TJC)、腫脹

3、關(guān)節(jié)數(shù)(Swollen joint count in 28 joints,SJC)、關(guān)節(jié)功能分期、X線分期、HAQ評(píng)分、抗環(huán)瓜氨酸(CCP)抗體、疾病活動(dòng)指數(shù)DAS28評(píng)分、C反應(yīng)蛋白(CRP)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、類風(fēng)濕因子(RF)及病程等。從上述實(shí)驗(yàn)對(duì)象中選取26例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者、另收集12例骨關(guān)節(jié)炎(OA)患者及10例正常對(duì)照組,用半定量Western blot方法檢測(cè)PBMCs中組蛋白H3R17不對(duì)稱的二甲基化,H4R3對(duì)

4、稱的二甲基化及單甲基化水平。分析PAD4 mRNA表達(dá)與組蛋白甲基化水平,以及兩者與其他各臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,非正態(tài)分布計(jì)量資料以中位數(shù)(范圍)表示,兩組數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,采用獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn),三組之間采用方差分析；兩組數(shù)據(jù)間的相關(guān)性符合正態(tài)分布采用Pearson相關(guān)分析,不符合正態(tài)分布采用Spearman相關(guān)分析。
　　結(jié)果:
　　1)RA組

5、PAD4mRNA相對(duì)表達(dá)量[34.6(16.7,70.8)]明顯高于正常對(duì)照組[20.6(11.1,51.8)](P<0.05)。RA組中PAD4mRNA表達(dá)與抗CCP抗體、DAS28評(píng)分水平、ESR、RF呈正相關(guān)(r=0.527,P<0.001;r=0.416,P=0.001;r=0.371,P=0.004;r=0.287,P=0.030),與CRP、病程無(wú)相關(guān)性(r=0.015,p=0.919;r=0.064,P=0.625)。

6、r>　　2)RA患者組蛋白H3R17不對(duì)稱的二甲基化水平(71.34±25.65)明顯高于OA(37.18±18.62)及正常對(duì)照組(50.67±13.99),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05);H3R17不對(duì)稱的二甲基化水平與PAD4無(wú)相關(guān)性(r=-0.185,p=0.377),與TJC和SJC正相關(guān)(r=0.418,p=0.034,r=0.402,p=0.042)。
　　3)RA患者H4R3對(duì)稱的二甲基化水平(75.02±20.

7、35)也高于OA(57.92±22.77)及正常對(duì)照組(68.37±17.57),但差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05):H4R3對(duì)稱的二甲基化水平與PAD4無(wú)相關(guān)性(r=0.198,p=0.344)。
　　4)RA患者H4R3單甲基化水平(11.24±7.81)明顯低于OA(32.77±30.77)及正常對(duì)照組(51.20±47.14.)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05):H4R3單甲基化水平與PAD4負(fù)相關(guān)(r=-0.643,P

8、<0.001),與抗CCP、DAS28評(píng)分,ESR,CRP,RF,病程、關(guān)節(jié)功能分期、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、腫脹數(shù)、HAQ評(píng)分、晨僵時(shí)間、X線分期無(wú)相關(guān)性(r=-0.147,p=0.505;r=0.037,p=0.860;r=-0.091,p=0.664;r=0.078,p=0.725;r=-0.212,p=0.309;r=0.162,p=0.440;r=0.276,p=0.172;r=0.275,p=0.174;r=0.243,p=0.232;

9、r=0.272,p=0.179;r=0.335,p=0.095;r=0.285,p=0.304)。
　　結(jié)論:
　　1)RA患者外周血PBMCsPAD4mRNA表達(dá)顯著增高,并與抗CCP抗體水平、DAS28評(píng)分、ESR、RF呈正相關(guān),可能是RA病情活動(dòng)的一個(gè)有用的指標(biāo),PAD4可能在RA的發(fā)病和病理過(guò)程中起重要作用。
　　2)RA患者外周血PBMCs中H3R17不對(duì)稱的二甲基化水平升高,H4R3單甲基化水平降低,組蛋白