小反芻獸疫全基因序列分析與核衣殼蛋白在昆蟲細胞中的表達.pdf

1、小反芻獸疫（Pest des petits ruminants，PPR）是由小反芻獸疫病毒（Pest des petits ruminants virus，PPRV）引起的烈性傳染病，其病毒主要危害山羊、綿羊等小反芻獸，以突然發(fā)病、高熱稽留、口瘡、流鼻涕、腹瀉等主要病癥，因其發(fā)病率和死亡率高，傳播速度快，被世界動物衛(wèi)生組織（The World Organisation for Animal Health，OIE）列為A類烈性重大傳染病之

2、一。小反芻獸疫病毒于2007年7月在我國西藏首次發(fā)現(xiàn)，相繼在2013年新疆伊犁大爆發(fā)，引起大批量的山羊、綿羊死亡，給養(yǎng)殖戶帶來巨大損失。隨后在我國20多個省、市大量流行、傳播。各地的有關(guān)部門也重視了該病毒的危害性，積極采取措施預(yù)防。筆者于2014年春季在廣東省某羊場送檢的樣本中首次檢測到了小反芻獸疫病毒，并把該毒株命名為CH/GDDG/2014。本研究對其全基因組特征、N基因抗原活性等進行了研究，有助于了解小反芻獸疫病毒的分子流行病學(xué)，

3、也為小反芻獸疫病毒的診斷研究奠定基礎(chǔ)。本研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　1．本研究利用RT-PCR分11段重疊cDNA擴增小反芻獸疫病毒基因全長序列獲得PPRV全基因組，并命名為CH/ GDDG/2014株，經(jīng)序列測定與GenBank中收錄的23條小反芻獸疫參考毒株的序列進行核苷酸同源性分析，構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。結(jié)果顯示CH/ GDDG/2014株基因組含有15954個核苷酸，獲得的全長序列比國外分離的毒株要多6個核苷酸（TCCCTC），由

4、于這6個核苷酸的插入可能導(dǎo)致病毒滴度降低，對細胞的培養(yǎng)造成一定的困難。該基因組包括六個開放閱讀框（ORFs）分別編碼核衣殼蛋白，磷蛋白，基質(zhì)蛋白，融合蛋白，血凝素，和大聚合酶蛋白。與參考株之間的核苷酸同源性為87.2％?99.8％，其中發(fā)現(xiàn)CH/ GDDG/2014株與China/XJYL/2013株同源性最高（99.8％），與KN5/2011同源性最低（87.2％）。小反芻獸疫病毒CH/GDDG/2014株與國內(nèi)近2年的小反芻獸疫病毒

5、毒株均在系統(tǒng)進化樹上處于同一分支，而與國外毒株處于不同分支。進一步表明目前國內(nèi)流行的小反芻病毒親緣關(guān)系較近，且主要以IV系流行。構(gòu)建了PPRV的全長cDNA為拯救PPRV奠定了基礎(chǔ)。
　　2．本研究成功構(gòu)建了小反芻獸疫N基因的重組穿梭質(zhì)粒pFastBac-PPRV-N，經(jīng)測序正確，轉(zhuǎn)化到DH10Bac大腸桿菌感受態(tài)細胞，經(jīng)過藍白斑篩選轉(zhuǎn)座后獲得重組桿狀病毒桿粒Bacmid-PPRV-N，轉(zhuǎn)染生長良好的Sf9細胞，獲取重組桿狀病毒。