紅棕杜鵑（原變種）葉、美洲大蠊及白三葉草植物內(nèi)生真菌煙曲霉的化學(xué)成分研究.pdf

1、糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，DN）是由糖尿病引起的并發(fā)癥，死亡率高，危害極大，現(xiàn)無有效的治療藥物，但在臨床上中醫(yī)的活血化瘀理法方藥卻顯示出較好的治療效果，特別是活血化瘀藥大黃及其有效成分大黃酸經(jīng)研究證明具有較明顯防治DN的作用，因此，目前急需從活血化瘀藥中篩選得到防治DN的藥物。
　　紅棕杜鵑（原變種）Rhododendron rubiginosum Franch. var. rubiginosum[原名

2、：涼山杜鵑Rhododendron Liangshanicum L.S.Chen, mss（未發(fā)表名）]葉，為一味涼山彝族藥，性味辛溫，止咳、平喘，用于慢性氣管炎。除此之外，本品在民間還用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與跌打損傷等癥的治療，以及在臨床上還發(fā)現(xiàn)本品的制劑具有防治感冒、流感、高血壓的作用，這些說明了本品還具活血化瘀之功。但到目前為止，本品的化學(xué)成分研究相當(dāng)薄弱，因此，為闡明本品活血化瘀的藥效物質(zhì)及防治DN的作用，本論文首先選取紅棕杜鵑（原變

3、種）葉進行化學(xué)成分研究。
　　動物藥美洲大蠊Periplaneta americana，性味咸寒。有小毒。散瘀消積，解毒利尿，具有抗腫瘤、抗病毒、組織修復(fù)、抗炎等作用。當(dāng)前，本品制劑開發(fā)較為成功，現(xiàn)已有多個制劑應(yīng)用于臨床，然而，較之而言，美洲大蠊的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究則嚴重滯后，與本品強大、特異的藥效作用極不適應(yīng)，因此，為闡明美洲大蠊的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及防治DN作用，本論文其次選取動物藥美洲大蠊進行化學(xué)成分研究。
　　為尋找一條防治

4、外來入侵生物物種紫莖澤蘭的生物防治方法，本論文對白三葉草的植物內(nèi)生真菌進行了研究。從白三葉草葉中分離得一株真菌，鑒定為煙曲霉。采用大米固體培養(yǎng)基發(fā)酵，其乙酸乙酯提取物具有抑制白菜種子發(fā)芽的能力，因此，對此部位進行了化學(xué)成分研究，現(xiàn)分離得五個蒽醌與四個結(jié)構(gòu)奇特的生物堿。由于此菌株能產(chǎn)蒽醌，且其產(chǎn)量不低，因此，對這五個蒽醌化合物還進行了與DN有關(guān)的活性測試。
　　綜上，本論文根據(jù)中醫(yī)藥活血化瘀理論，選取三個種，其中兩個為活血化瘀藥，一

5、個為性味辛溫的紅棕杜鵑（原變種）葉，一個為性味咸寒的動物藥美洲大蠊，及一株產(chǎn)蒽醌的白三葉草植物內(nèi)生真菌煙曲霉，對它們進行了化學(xué)成分研究，對分離的五個蒽醌進行了與DN有關(guān)的活性測試，其余化合物的生物活性評價仍在進行中。
　　本論文首先對基原不清且重名的涼山杜鵑 Rhododendron Liangshanicum L.S.Chen, mss（未發(fā)表名）進行了基原鑒定，鑒定本種為紅棕杜鵑（原變種） Rhododendron rubig

6、inosum Franch. var. rubiginosum，解決了《金鵑咳喘停合劑》的原料藥基原長期不清且重名的問題。
　　其次，應(yīng)用硅膠、反相硅膠（RP-C18）、葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20）、MCI CHP20、半制備 HPLC等多種分離材料和分離技術(shù)，結(jié)合現(xiàn)代波譜分析方法，從以上三種中分離并鑒定了56個化合物，其中新化合物3個，化合物的結(jié)構(gòu)類型涉及降倍半萜、三萜、苯基丁醇衍生物、木脂素、香豆素、二氫異香豆素

7、、苯環(huán)衍生物、環(huán)二肽、生物堿、蒽醌、甾體等結(jié)構(gòu)類型。
　　從紅棕杜鵑（原變種）葉中分離化合物共計23個，經(jīng)理化與波譜數(shù)據(jù)分別鑒定為：3,9-dihydroxy-megastigma-5-ene（1-1），3β-hydroxy-5ɑ,6ɑ-epoxy-7-megastigmen-9-one（1-2），黑麥草內(nèi)酯（1-3），熊果酸（1-4），2ɑ,3β-二羥基烏蘇-12-烯-28-酸（1-5），2ɑ,3β,23-三羥基烏蘇-12-烯-

8、28-酸（1-6），7,9-二甲氧基杜鵑醇（1-7），7-甲氧基杜鵑醇（1-8），姜酮（1-9），異嗪皮啶（1-10），東莨菪內(nèi)酯（1-11），松脂素（1-12），3'-O-去甲氧基松脂素（1-13），反式阿魏酸（1-14)，二氫阿魏酸甲基酯（1-15），1-（4-羥基-3,5-二甲氧基苯基）丙烷-1-酮（1-16），順式肉桂酸（1-17），苯乙酸（1-18），香草酸（1-19），對羥基苯甲醛（1-20），對羥基苯甲酸乙酯（1-21），

9、對羥基苯乙酸乙酯（1-22），草質(zhì)素-8-甲醚（1-23）。以上所有化合物均首次從本種中分得，其中化合物（1-1）-（1-3）、（1-7）-（1-9）、（1-11）-（1-13）、（1-15）-（1-18）、（1-20）-（1-23）首次從本屬分得。同時，本研究還初步證明本種葉中不含二萜類有毒成分。
　　從美洲大蠊中共分離化合物24個，經(jīng)理化與波譜數(shù)據(jù)分別鑒定為：水楊酸（2-1），原兒茶酸（2-2），Picein(p-acetyl

10、-phenyl-O-β-D-glucopyrannoside，2-3)，苯甲酸-1-O-β-D-葡萄糖苷（2-4）， trans-2-（3′,4′-dihydroxyphenyl）-3-acetylamino-6-hydroxyethyl-1,4-benzodioxane（2-5）， trans-2-（3′,4′-dihydroxyphenyl）-3-acetylamino-6-（N-acetyl-2″-aminoethyl）-1,4-

11、benzodioxane（2-6）， trans-2-（3′,4′-dihydroxyphenyl）-3-acetylamino-7-（N-acetyl-2″-aminoethyl）-1,4-benzodioxane（2-7），5ɑ-膽甾烷-3β,5,6β-三醇（2-8）,Pericanaside[（3R）-3-甲基-7-羥甲基-8-羥基-3,4-二氫異香豆素-6-O-β-D-葡萄吡喃糖苷），2-9]，（3R）-3,7-二甲基-8-羥基

12、-3,4-二氫異香豆素-6-O-β-D-葡萄吡喃糖苷（2-10），（3R）-3-乙基-7-羥甲基-8-羥基-3,4-二氫異香豆素-6-O-β-D-葡萄吡喃糖苷（2-11），（3R）-3-甲基-7-甲氧基甲基-8-羥基-3,4-二氫異香豆素-6-O-β-D-葡萄吡喃糖苷（2-12），胸腺嘧啶（2-13），尿嘧啶（2-14），腺嘌呤（2-15），腺苷（2-16），尿苷（2-17），煙酰胺（2-18），順-環(huán)（L-丙氨酸-L-脯氨酸）二肽（2

13、-19）， L-焦谷氨酸甲酯（2-20），3,4-二羥基苯甲醇（2-21），對羥基苯甲酸葡萄糖酯（2-22），β-D-呋喃果糖（2-23），丙三醇（2-24）。化合物（2-9）-（2-12）為四個二氫異香豆素化合物，其中化合物（2-10）-（2-12）為新化合物，它們均屬于美洲大蠊的特異性成分，此成果豐富了動物藥美洲大蠊的化學(xué)成分類型，也為美洲大蠊強大的藥效作用研究與新藥創(chuàng)制提供了堅實的基礎(chǔ)。
　　從白三葉草植物內(nèi)生真菌煙曲霉的次

14、生代謝產(chǎn)物中共分離化合物9個，經(jīng)理化與波譜數(shù)據(jù)鑒定為：大黃素-1-甲醚（3-1），大黃素-8-甲醚（3-2），asperfumin（3-3），monomethylsulochrin（3-4），trypacidin（3-5），pyripyropene A（3-6）， verruculogen（3-7），fumigaclavine C（3-8），fumiquinazoline J（3-9）。
　　對分離的五個蒽醌化合物[（3-1）-（

15、3-5）]進行了鈣流、細胞遷移、與腎纖維化有關(guān)的三個細胞因子[膠原蛋白Ⅰ（Collagen-Ⅰ，C-Ⅰ）、膠原蛋白Ⅳ（Collagen-Ⅳ，C-Ⅳ）、轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor，TGF）]的mRNA轉(zhuǎn)錄水平的活性測試。測試結(jié)果如下：
　　1)大黃素-1-甲醚（3-1）具有促進鈣離子細胞內(nèi)流的中等活性；
　　2)在高糖條件下，大黃素-1-甲醚（3-1）具有最強的細胞運動能力；
　　

16、3)在高糖條件下，化合物（3-1）-（3-5）均具有比陽性對照藥大黃酸還強的抑制C-Ⅳ表達的能力，其中trypacidin（3-5）的作用最強；
　　4)高糖條件下，化合物（3-1）-（3-5）在抑制TGF的表達方面，作用均稍強于陽性對照藥大黃酸，其中大黃素-1-甲醚（3-1）作用最佳；
　　5)而在抑制C-Ⅰ表達方面，五個蒽醌成分均弱于陽性對照藥大黃酸。
　　通過以上的活性測試，篩選到大黃素-1-甲醚（3-1）與tr

17、ypacidin（3-5）具有較明顯的活性，此為DN的藥物篩選提供了新的思路與篩選范圍。
　　對比以上紅棕杜鵑（原變種）葉與美洲大蠊的化學(xué)成分研究，得出簡單酚酸類成分是二者的共性，同時結(jié)合上述的活性測試，得出簡單酚酸類成分是活血化瘀的藥效物質(zhì)，其防治DN的作用可能僅與某個酸酸結(jié)構(gòu)片段有關(guān)。
　　通過活性篩選，說明蒽醌類成分防治DN的作用靶點不同，造成同一個化合物對不同的作用靶點有活性大小的區(qū)別，這個結(jié)論佐證了中藥多組分多靶點