兔脂肪干細(xì)胞與PLA-PEG共聚物生物相容性研究.pdf

1、目的：建立兔脂肪干細(xì)胞（rabbit adipose-derived stem cells，rADSCs）的分離培養(yǎng)方法，探討rADSCs的生物學(xué)特性，及其體外復(fù)合聚乳酸-聚乙二醇共聚物（polylactide-polyethylene glycol copolymers，PLA-PEG）的生物相容性，為進(jìn)一步構(gòu)建脂肪干細(xì)胞組織工程化角膜組織提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：（1）采用膠原酶消化法及貼壁篩選法分離純化rADSCs，采用體外

2、誘導(dǎo)成骨、成脂實(shí)驗(yàn)對(duì)rADSCs的多向分化潛能進(jìn)行驗(yàn)證。（2）采用不同復(fù)感染指數(shù)（Multiplicities of infection，MOI）值的慢病毒載體轉(zhuǎn)染rADSCs，熒光倒置顯微鏡下觀察綠色熒光（green fluorescence protein，GFP）表達(dá)的情況并統(tǒng)計(jì)其相應(yīng)的轉(zhuǎn)染效率，MTT法檢測負(fù)載GFP的慢病毒轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞生長狀態(tài)的影響情況，進(jìn)一步評(píng)價(jià)GFP負(fù)載慢病毒對(duì)細(xì)胞的毒性情況。（3）將轉(zhuǎn)染的rADSCs接種于

3、PLA-PEG支架上，通過Hoechst DNA定量法觀察第1天至第8天材料上細(xì)胞的增殖情況；LDH細(xì)胞毒性檢測評(píng)估PLA-PEG材料對(duì)rADSCs的細(xì)胞毒性；激光共聚焦顯微鏡、掃描電子顯微鏡觀察接種后1,3,5和7天細(xì)胞在支架上的生長、粘附等情況。
　　結(jié)果：（1）原代rADSCs多呈短棒狀、聚集生長傾向。傳代后細(xì)胞均勻、呈成纖維細(xì)胞樣生長。體外成脂分化誘導(dǎo)2周，油紅O染色胞質(zhì)可見紅色脂滴；成骨分化誘導(dǎo)2周茜素紅染色可見礦化結(jié)節(jié)

4、。（2）當(dāng)復(fù)感染指數(shù)MOI為50、100、500時(shí)慢病毒介導(dǎo)GFP均可成功轉(zhuǎn)染rADSCs，MOI為100時(shí)，細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率可達(dá)50％以上且對(duì)細(xì)胞的正常生長沒有顯著影響。（3）MTT法顯示細(xì)胞接種于PLA-PEG材料后隨時(shí)間延長細(xì)胞數(shù)量增加，第7天細(xì)胞生長達(dá)到高峰。激光共聚焦顯微鏡顯示，細(xì)胞在PLA-PEG材料上生長良好且隨培養(yǎng)時(shí)間延長細(xì)胞數(shù)量增加。掃描電子顯微鏡顯示，細(xì)胞在材料表面緊密貼附并分泌細(xì)胞外基質(zhì)使細(xì)胞緊密生長。
　　結(jié)論