巴馬香豬血液生理化指標參考標準的建立及ENU誘變下血液指標異常個體的篩選.pdf

1、巴馬香豬在作為遺傳、發(fā)育、疾病模型以及提供異種移植器官等方面具有其它動物不可替代的優(yōu)勢,并廣泛應(yīng)用于心血管系統(tǒng)以及異種臟器移植等研究中。巴馬香豬的血液生理生化指標是病理、生理以及毒理學(xué)研究工作的重要基礎(chǔ)性指標,也是判定巴馬香豬生理狀態(tài)的重要依據(jù)。但小型豬作為新興的大型實驗動物飼養(yǎng)標準還未統(tǒng)一,為防止小型豬過度采食導(dǎo)致長胖,許多研究單位對小型豬飼養(yǎng)采取限飼,這可能導(dǎo)致血液生理生化指標的測定產(chǎn)生誤差?；瘜W(xué)誘變劑ENU進行遺傳修飾是制備疾病動

2、物模型的新方法,并且與傳統(tǒng)的基因敲除和基因轉(zhuǎn)入的方法相比,速度更快、挖掘基因的力度更高,可以在短時間內(nèi)產(chǎn)生數(shù)目巨大的突變動物。由于ENU誘變的隨機性以及不確定性,篩選突變疾病動物模型的技術(shù)和方法就顯得尤為重要,通過對ENU誘變后Fl代巴馬香豬進行血液生理生化指標篩查,不僅能很好的完善和補充疾病動物模型的篩選方法,并能獲得血液指標異常個體。因此我們在本實驗中,將336頭斷奶巴馬香豬根據(jù)限飼水平的不同隨機分為對照組、80％日糧組和50%日糧

3、組,在60日齡和90日齡前腔靜脈采集血液樣本,對重要的10項血液生理指標和7項血液生化指標進行測定,統(tǒng)計不同限飼水平下指標的差異,獲得了巴馬香豬血液生理生化指標的基礎(chǔ)數(shù)據(jù),建立了血液生理生化指標的參考范圍和飼養(yǎng)標準。隨后將課題組先期ENU誘變成功的7頭FO代種公豬與野生型母豬交配,獲得1101頭后代即Fl代理論上攜帶遺傳突變基因的個體,再通過對其血液生理生化指標的測定,對血液指標值超過數(shù)據(jù)統(tǒng)計Mean±2SD的個體重復(fù)檢測,對比正常巴馬

4、香豬血液學(xué)指標獲得5頭血液指標異常個體。結(jié)果如下:
　　一、健康巴馬香豬血液生理生化指標參考標準的建立
　　我們通過對三個試驗組之間巴馬香豬血液指標的測定和分析可以發(fā)現(xiàn),巴馬香豬血液生化指標中ALT,TP,UREA和CREA指標值跟限飼水平呈正相關(guān);而TCHOL和GLU指標值跟限飼水平呈負相關(guān)。血液生理指標中RBC,HGB,HCT,MCH和MCHC指標含量跟限飼水平成正相關(guān);而PLT,MCV,RDW-SD和RDW-CV指標含

5、量跟限飼水平成負相關(guān)。在50%限飼水平下,巴馬香豬血液生理生化指標與對照組和20%限飼組之間存在明顯差異。同時由于巴馬香豬雜食性的特點,適當(dāng)?shù)奶砑忧囡暳戏掀渖L規(guī)律和身體需求,對建立巴馬香豬血液生理生化標準參數(shù)有積極作用,因此在本次實驗中,對巴馬香豬進行20%限飼比未限飼和50%限飼更能獲得穩(wěn)定標準的巴馬香豬血液生理生化指標,實驗獲得的20%限飼組巴馬香豬血液生理生化指標可作為其標準參考范圍。
　　、Fl代血液生理生化指標異常個

6、體
　　將課題組先期誘變成功的FO代種公豬共7頭與野生型母豬交配,獲得1101頭Fl代個體,然后對血液生理生化指標進行嚴格篩選,對指標值超過統(tǒng)計量Mean±2SD的個體進行復(fù)檢,結(jié)果顯示65mg/kg劑量組FO代巴馬香豬共配種獲得464頭Fl代個體,未發(fā)現(xiàn)血液指標異常個體;85mg/kg劑量組FO代巴馬香豬共產(chǎn)生637頭Fl代個體,其中發(fā)現(xiàn)血液生理指標異常個體2頭,血液生化指標異常個體3頭,血液指標突變率為7.85‰,表明在以血液

7、指標為標準的表型篩選中,85mg/kg劑量組明顯優(yōu)于65mg/kg劑量組能獲得更多血液指標異常個體。異常個體中006002(♂)初檢和復(fù)檢平均紅細胞體積(MCV)值(71.5fL、72.3fL、70.8fL),027098(♂)初檢和復(fù)檢血小板(PLT)值(779×l09/L、791×l09/L、783×l09/L),006009(♂)初檢和復(fù)檢谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)值(116u/L、131u/L、124u/L);006111(早)初檢和

8、復(fù)檢甘油三酯(TG)值(1.89mmol/L、1.64mmol/L、1.21mmol/L)和尿素(UREA)值(12.3mmol/L、13.8mmol/L、10.0mmol/L)都高于數(shù)據(jù)統(tǒng)計Mean+2SD值,也高于正常巴馬香豬血液生理生化指標參考值;027020(♂)初檢和復(fù)檢總蛋白(TP)值(38g/L、46g/L、40g/L)低于數(shù)據(jù)統(tǒng)計Mean-2SD值,也低于正常巴馬香豬血液生理生化指標參考值,初步可判斷這5個個體可能為EN