高血壓的表觀遺傳調(diào)控和靶器官損害腦卒中的相關(guān)研究及FBN1基因新突變導(dǎo)致馬凡綜合征心血管表型.pdf

1、第一部分肥胖高血壓的全基因組甲基化研究
　　目的:超重和肥胖正在世界范圍內(nèi)流行，據(jù)估計(jì)，到2030年，超重人群達(dá)21.6億，肥胖者達(dá)11.2億，增加2型糖尿病、心血管疾病、癌癥和死亡風(fēng)險(xiǎn)。然而，通過(guò)飲食、鍛煉、外科手術(shù)和藥物治療減少肥胖的干預(yù)手段不能解決長(zhǎng)期問(wèn)題。當(dāng)脂肪組織中儲(chǔ)存過(guò)多的甘油三酯，釋放大量自由脂肪酸產(chǎn)生不利效應(yīng)時(shí)，就出現(xiàn)肥胖。肥胖是高血壓的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，肥胖高血壓患者心血管疾病的死亡率和發(fā)病率增加，同時(shí)常合并多種

2、其他疾病如慢性腎臟疾病、2型糖尿病、睡眠呼吸暫停綜合征和動(dòng)脈粥樣硬化等。研究顯示，肥胖增加腎小管鈉吸收，血漿鈉水平升高，促使壓力-尿鈉曲線代償性右移，從而升高血壓。在糖尿病人群和肥胖動(dòng)物模型中，鈉-葡萄糖同向轉(zhuǎn)運(yùn)體-2在近曲小管上表達(dá)增加，葡萄糖重吸收增加，從而導(dǎo)致鈉重吸收增加和鈉潴留。此外，高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠中，Na+-K+-2Cl-同向轉(zhuǎn)運(yùn)體磷酸化增加，同時(shí)該轉(zhuǎn)運(yùn)體活性增加，介導(dǎo)鈉重吸收增加，參與肥胖高血壓的形成。因此，肥胖高血

3、壓可能是多種途徑介導(dǎo)激活鈉通道所致。這項(xiàng)研究的第一部分從全基因組水平在單純肥胖組、對(duì)照組、單純高血壓組和肥胖高血壓組的任兩組之間，比較外周血DNA甲基化譜和全轉(zhuǎn)錄本水平，找到影響基因表達(dá)的差異甲基化位點(diǎn)，為后續(xù)探索肥胖相關(guān)因素影響腎小管上皮鈉通道基因的表觀遺傳調(diào)控提供依據(jù)。
　　方法:在2012年我們初步建立一個(gè)包含100個(gè)人的樣本數(shù)據(jù)庫(kù)，所有入選人群年齡為50～74歲，且無(wú)心腦血管事件。100例樣本分為4組，每組25例:1.單純

4、肥胖組(G1):本次入選單純肥胖患者的標(biāo)準(zhǔn)為BMI≥27 kg/m2;2.對(duì)照組(G2):18.5 kg/m2≤BMI≤24 kg/m2且血壓＜140/90 mmHg;3.單純高血壓組(G3):本次入選單純高血壓患者的血壓標(biāo)準(zhǔn)為收縮壓≥160 mmHg和/或舒張壓≥100 mmHg或正在服用降壓藥物;4.肥胖高血壓(G4):同時(shí)符合G1和G3的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)芯片質(zhì)控結(jié)果，DNA甲基譜采用芯片分析58個(gè)樣本，表達(dá)譜采用芯片分析52個(gè)樣本，最后

5、關(guān)聯(lián)分析兩張芯片中重疊的52個(gè)樣本的數(shù)據(jù)，單純肥胖組、對(duì)照組、單純高血壓組和肥胖高血壓組均為13例，且為年齡匹配的男性。
　　結(jié)果:根據(jù)DNA甲基化芯片和表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)的關(guān)聯(lián)分析，單純肥胖組存在4個(gè)低甲基化CpG位點(diǎn)（cg01601XXX、cg08330XXX、cg19651XXX、cg27239XXX），1個(gè)高甲基化CpG位點(diǎn)(cg02193XXX);單純高血壓組存在5個(gè)低甲基化CpG位點(diǎn)(cg01601XXX、cg08330X

6、XX、cg16819XXX、cg19651XXX、cg12623XXX);肥胖高血壓組存在1個(gè)低甲基化CpG位點(diǎn)(cg02193XXX)。A基因body區(qū)上3個(gè)CpG位點(diǎn)(cg01601XXX、cg08330XXX、cg19651XXX)在G1 vs.G2和G2 vs.G3中甲基化水平降低，且與A基因mRNA表達(dá)水平上調(diào)/下調(diào)相關(guān)。B基因5'UTR區(qū)上1個(gè)CpG位點(diǎn)(cg02193XXX)在G1 vs.G2和G4 vs.G1中高甲基化或

7、低甲基化，且與B基因mRNA表達(dá)水平升高有關(guān)。因此，在肥胖和高血壓中，這4個(gè)CpG位點(diǎn)(cg01601XXX、cg08330XXX、cg19651XXX、cg02193XXX)均有甲基化程序的改變，且與A和B基因mRNA表達(dá)水平的改變相關(guān)。
　　結(jié)論:我們的研究采用最新的Illumina450k甲基化芯片檢測(cè)全基因組DNA甲基化位點(diǎn)，同時(shí)利用Affymetrix表達(dá)譜芯片檢測(cè)全轉(zhuǎn)錄本水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4個(gè)CpG位點(diǎn)(cg01601X

8、XX、cg08330XXX、cg19651XXX、cg02193XXX)甲基化程度的改變可能與肥胖高血壓的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。
　　第二部分中國(guó)農(nóng)村基于社區(qū)的卒中醫(yī)療體系
　　背景和目的:在2005年，美國(guó)卒中協(xié)會(huì)(ASA)工作組推薦建立卒中醫(yī)療體系，優(yōu)化卒中患者的治療和管理流程，并改善患者預(yù)后。據(jù)統(tǒng)計(jì)，一個(gè)完善的卒中醫(yī)療體系可以減少2％～3％卒中相關(guān)的死亡，同時(shí)，卒中后的致殘也降低，這有助于改善患者的生活質(zhì)量，減少患者及其家庭和

9、政府的負(fù)擔(dān)。卒中醫(yī)療體系在為卒中患者提供有效的治療和改善卒中預(yù)后方面發(fā)揮重要作用。我們的目的是在農(nóng)村地區(qū)建立一個(gè)完善的卒中醫(yī)療體系，并對(duì)其效果進(jìn)行評(píng)估。
　　方法:從2009年11年至2011年11月，我們?cè)谮M榆縣建立一個(gè)卒中醫(yī)療體系，并將其他3個(gè)相匹配的社區(qū)作為對(duì)照。首先，我們調(diào)查了這些社區(qū)的卒中管理，接著在3個(gè)干預(yù)社區(qū)實(shí)施完善的卒中醫(yī)療體系和教育項(xiàng)目，隨訪2年，我們?cè)u(píng)估其實(shí)施效果。
　　結(jié)果:6個(gè)社區(qū)344345人口中，

10、有1036例新發(fā)卒中患者，卒中發(fā)病率為301/100000，死亡率為55/100000。與對(duì)照社區(qū)相比，2012年干預(yù)社區(qū)在實(shí)施卒中醫(yī)療體系和教育項(xiàng)目后，3小時(shí)內(nèi)就診（12.01％ vs.8.13％; P=0.044）、入院24小時(shí)內(nèi)行CT檢查（61.70％ vs.55.08％; P=0.036）和接受溶栓治療（2.07％ vs.1.02％; P=0.181）的患者比例顯著增加。2013年，3小時(shí)內(nèi)就診（15.15％ vs.9.70％，

11、P=0.008）、入院24小時(shí)內(nèi)行CT檢查（69.09％ vs.61.98％; P=0.017）和接受溶栓治療(3.03％ versus1.14％; P=0.034)的患者比例增加更顯著。2012年，干預(yù)社區(qū)和對(duì)照社區(qū)死亡人數(shù)分別為43(8.90％)和48(9.76％)。2013年，與對(duì)照組相比，干預(yù)組病死率顯著降低（6.06％ vs.9.70％; P=0.032）;干預(yù)組在實(shí)施卒中醫(yī)療體系和教育項(xiàng)目后致殘率也逐年降低（45.25％ v

12、s.51.52％; P=0.045）。
　　結(jié)論:我們的研究首次在中國(guó)農(nóng)村地區(qū)建立、實(shí)施并評(píng)估了這樣一個(gè)卒中醫(yī)療體系，同時(shí)也證實(shí)，該體系可靠且可行。社區(qū)教育增加公眾的卒中知識(shí)，縮短卒中發(fā)作至到醫(yī)院就診的時(shí)間。實(shí)施卒中醫(yī)療體系使更多的患者能接受溶栓治療，減少致殘率。
　　Clinical Trial Registration—URL: http://www.chictr.org.
　　Unique identifier:

13、 ChiCTR-RCH-13003408.
　　第三部分 FBN1基因新突變導(dǎo)致馬凡綜合征心血管表型
　　目的:馬凡綜合征是一種結(jié)締組織常染色體顯性疾病，它主要影響心血管系統(tǒng)、視覺(jué)系統(tǒng)和骨骼肌系統(tǒng)。據(jù)估計(jì)，馬凡綜合征的患病率為1/5000～1/10000，同時(shí)有25％的散發(fā)病例。大量研究顯示，原纖維蛋白-1(FBN1)基因的不同突變導(dǎo)致馬凡綜合征。FBN1基因的突變破壞細(xì)胞外原纖維蛋白-1前體加工為原纖維蛋白-1。馬凡綜合征

14、患者在心血管系統(tǒng)、視覺(jué)系統(tǒng)和骨骼肌系統(tǒng)中表現(xiàn)出明顯的表型變化。在這項(xiàng)研究中，我們報(bào)道兩個(gè)馬凡綜合征患者，他們由FBN1基因新突變所致，主要引起心血管臨床表型。
　　方法:兩個(gè)患者即患者-1和患者-2因需行主動(dòng)脈瘤外科手術(shù)收住我們醫(yī)院，根據(jù)Ghent標(biāo)準(zhǔn)診斷為馬凡綜合征。抽取參加者（患者-1及其女兒和兒子、患者-2及其父母）的外周血，提取全基因組DNA?；颊?1馬凡綜合征診斷明確，僅檢測(cè)FBN1基因突變。對(duì)于患者-2，首先采用二代測(cè)

15、序，確定致病基因?yàn)镕BN1突變，然后對(duì)突變位點(diǎn)進(jìn)行PCR驗(yàn)證。
　　結(jié)果:患者-1和其女兒測(cè)序的結(jié)果發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的雜合移碼突變，位于FBN1基因12外顯子上，c.1560-1566(GAGCACA)缺失導(dǎo)致從第520位氨基酸開始變化，終止密碼子出現(xiàn)在第575位氨基酸，此后的氨基酸丟失?；颊?1的兒子無(wú)突變?；颊?2發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的錯(cuò)義突變，c.6575T＞C，p.2068C＞R，位于FBN1基因50外顯子上。患者-2的父親和母親無(wú)FBN