磷酸二酯酶抑制劑干預(yù)大鼠繼發(fā)性脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察磷酸二酯酶抑制劑(已酮可可堿)對(duì)脊髓繼發(fā)性損傷的影響,對(duì)繼發(fā)性損傷神經(jīng)細(xì)胞凋亡有否治療價(jià)值,為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:選用3-4月齡雄性SD大鼠124只,體重250+30g,隨機(jī)分為:單純損傷組(SCI)、損傷+甲基強(qiáng)地松龍組(SCI+MP)、損傷+已酮可可堿組(SCI+PTX).每組40只大鼠,分為4h、8h、24h、3 d、7d五個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只大鼠.SCI+MP組腹腔注射甲基強(qiáng)地松龍,劑量30mg/kg/d

2、:SCI+PTX組腹腔注射已酮可可堿,劑量30mg/kg/d.觀測(cè)指標(biāo):(1)神經(jīng)功能評(píng)價(jià):第1d、3d、7d進(jìn)行測(cè)試.以美國(guó)Tarlov法為準(zhǔn).采用改良的Rivlin和Tator法,進(jìn)行斜板實(shí)驗(yàn).(2)損傷脊髓含水量、離子含量測(cè)定:不同時(shí)間點(diǎn),切取脊髓組織,用Ellicot法計(jì)算組織含水量.根據(jù)Happel法,將100mg±10 mg脊髓標(biāo)本制成樣本,用原子吸收火焰光譜法測(cè)定鈉、鉀、鈣含量.(3)MDA、SOD含量測(cè)定:取100mg左

3、右脊髓組織,用硫代巴比妥酸法(TBA)測(cè)定丙二醛(MDA);黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD).(4)脊髓組織形態(tài)學(xué)改變:不同時(shí)間點(diǎn),左心室-主動(dòng)詠灌注4﹪多聚甲醛,固定組織.切取脊髓組織1cm,固定后,脫水、石蠟包埋、連續(xù)切片.切片厚3μm,一部分行HE染色:一部分切片后,行TUNEL染色.統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示,在SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件下進(jìn)行處理.檢驗(yàn)水準(zhǔn):α=0.05.小結(jié):1.Allen's重物墜擊法制

4、作出中度不完全脊髓損傷動(dòng)物模型,與人類脊髓損傷性質(zhì)相似.2.甲基強(qiáng)的松龍用于脊髓損傷的早期治療,自從90年代以來,國(guó)內(nèi)外公認(rèn)為首選和療效可靠的治療藥物.3.已酮可可堿治療脊髓繼發(fā)性損傷,減輕脊髓組織的水腫,抑制Ca<'2+>升高,MDA下降,SOD升高,有效的阻斷部分自由基反應(yīng),保護(hù)脊髓組織,避免脊髓繼發(fā)性損傷,有利于康復(fù),病理結(jié)果也證實(shí).已酮可可堿與甲基強(qiáng)的松龍治療脊髓損傷,統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示療效相似.為治療SCI尋找一價(jià)廉、有效、無明顯毒副