大鼠種植型肝癌電化學(xué)治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 大鼠種植型肝癌模型的建立;研究目的:分別采用直接注射法和瘤塊嵌插法制作大鼠Walker-256種植型肝癌動(dòng)物模型,觀察種植型肝癌的影像學(xué)、病理學(xué)特征,比較兩種方法的接種陽(yáng)性率、腫塊大小、生長(zhǎng)速度、肝臨近臟器浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移情況.材料和方法:凍存的Walker-256瘤株復(fù)蘇.SD雄性成年大鼠40只,體重200±20g;隨機(jī)分兩組.直接注射法是將經(jīng)過(guò)離心濃縮的微量癌性腹水直接注入大鼠肝臟,瘤塊嵌插法采用微小瘤組織塊嵌入大鼠肝臟包膜下種植

2、腫瘤.1周后,兩組大鼠均行CT平掃、增強(qiáng)掃描及MRI掃描,觀察腫瘤的大小、密度、信號(hào)、邊緣等.病理大體及HE染色后光鏡下觀察其病理學(xué)特征.根據(jù)影像學(xué)、病理學(xué)結(jié)果比較兩種方法的接種陽(yáng)性率、腫塊大小、生長(zhǎng)速度、肝臨近臟器浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移情況.結(jié)論:大鼠Walker-256種植型肝癌在肝內(nèi)呈膨脹性和浸潤(rùn)性生長(zhǎng),其影像學(xué)表現(xiàn)與人原發(fā)性肝癌相似,適宜于肝癌介入治療的實(shí)驗(yàn)研究.直接注射法與瘤塊嵌插法比較具有以下優(yōu)點(diǎn):1、成瘤時(shí)間短,大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期.2、

3、制作方法更簡(jiǎn)易.但直接注射法由于采用癌性腹水直接注射,存在沿針道返流可能性,鄰近臟器浸潤(rùn)機(jī)會(huì)增多.第二部分 大鼠種植型肝癌電化學(xué)療效評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究;研究目的:采用電化學(xué)療法治療大鼠處植型肝癌,通過(guò)大鼠種植型肝癌電化學(xué)療法治療前后影像學(xué)、病理組織學(xué)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞免疫功能改變、系列細(xì)胞因子(IL-2、sIL-2R、IL-6、TNF-α)表達(dá)水平變化、生存期的觀察比較,全面而合理地評(píng)價(jià)電化學(xué)療法對(duì)大鼠種植型肝癌的療效,為臨床相關(guān)研究工作的開

4、展奠定基礎(chǔ).材料和方法:Walker-256種植型肝癌大鼠50只,隨機(jī)分兩組:電化學(xué)治療組35只,荷瘤對(duì)照組15只,另取同樣大小正常大鼠10只做空白對(duì)照組.電化學(xué)治療組大鼠無(wú)菌狀態(tài)下開腹,暴露出荷瘤肝葉,直視下將鉑金電極針平行插入肝腫瘤中,深度要穿通腫瘤,陽(yáng)極位于瘤體中心,周邊按等邊三角形分布各插入三根陰極電針,陰陽(yáng)極電針相距約3~4mm,接通電化學(xué)治療儀,控制電壓為6~8V,電流10~20mA,治療時(shí)間約10min,總電量約30庫(kù)侖.

5、大鼠種植型肝癌電化學(xué)療法治療后1、2周,分別行CT、MRI掃描,觀察腫瘤大小、密度、信號(hào)、邊緣等影像學(xué)特征變化.大鼠種植型肝癌電化學(xué)療法治療后1周,治療組和荷瘤對(duì)照組各將處死5只大鼠,切取腫瘤行病理學(xué)檢查,HE染色和甲基綠派洛寧G和馬體黃S組合染色(MG-P-MY組合染色)觀察肝腫瘤的壞死及細(xì)胞凋亡情況,并計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù).大鼠種植型肝癌電化學(xué)療法治療后1、2周,治療組大鼠和荷瘤、空白對(duì)照組大鼠一起,分別從眼眶采血,行流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周

6、血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8).電化學(xué)療法治療組和對(duì)照組大鼠于治療后1、2周,分別采用外周血進(jìn)行IL-2、sIL-2R、IL-6、TNF-α水平檢測(cè),并與空白對(duì)照組大鼠進(jìn)行比較.電化學(xué)治療后,治療組大鼠和荷瘤對(duì)照組大鼠各取10只,不再給予任何干預(yù),在相同情況下,觀察它們的生存時(shí)間,并進(jìn)行生存期的比較.結(jié)論:大鼠種植型肝癌腫瘤負(fù)荷導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能和細(xì)胞因子表達(dá)紊亂.電化學(xué)治療促進(jìn)腫瘤壞死,誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡,可明顯抑制腫瘤生長(zhǎng),