肝素酶mRNA在胃癌組織中的表達(dá)及體外抑制胃癌侵襲的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、為探討HPA與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系以及反義HPA、MMP9及正義TIMP1對人胃癌細(xì)胞系體外侵襲的影響，本課題首先采用RT-PCR和原位雜交技術(shù)聯(lián)合檢測了胃癌患者新鮮手術(shù)切除標(biāo)本中HPAmRNA的水平，揭示HPA與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上，選取HPA、MMP9為靶點(diǎn)，采用反義RNA技術(shù)，構(gòu)建HPA及MMP9的反義RNA真核表達(dá)載體，并同時構(gòu)建與MMP9作用拮抗的HMP1綠色熒光蛋白真核表達(dá)載體，然后將3個重組載體分別轉(zhuǎn)染人胃癌B

2、GC823細(xì)胞，用熒光倒置顯微鏡觀察TIMP1綠色熒光蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤細(xì)胞細(xì)胞周期的變化；運(yùn)用RT-PCR、Westernblot檢測胃癌細(xì)胞HPA、MMP9及TIMP1在mRNA及蛋白水平表達(dá)的改變；最后運(yùn)用Boydenchamber侵襲實(shí)驗(yàn)技術(shù)觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞體外侵襲力的改變，從基因、蛋白、細(xì)胞周期、細(xì)胞定位和腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為等多個方面深入探討下調(diào)HPA、MMP9的表達(dá)及活性對抑制胃癌侵襲的作用，為反義RNA技