乳腺腫瘤組織中NS基因表達(dá)和食管癌Eca-109細(xì)胞株RNA干擾的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究Nucleostemin(NS)基因在腫瘤組織中的表達(dá)情況，探討不同惡性程度及不同組織類型乳腺腫瘤組織中NS基因表達(dá)量的差異及NS基因特異性RNA干擾對(duì)食管癌Eca-109細(xì)胞株增殖能力的影響。 方法：1.提取腫瘤組織RNA，用半定量RT-PCR方法檢測(cè)腫瘤組織中是否有NS基因的表達(dá)；以GAPDH基因作內(nèi)參照，分析NS基因在不同惡性程度、不同組織類型、不同TNM分期及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的乳腺腫瘤中表達(dá)量方面的差異；2.用脂質(zhì)

2、體轉(zhuǎn)染法將NS特異性siRNA表達(dá)載體PCDNA4/C-NS-silencer和其空載體PCDNA4/C-Vector轉(zhuǎn)染人食管癌Eca-109細(xì)胞，分別用Zeocin抗生素篩選獲得穩(wěn)定整合有兩種載體的陽(yáng)性細(xì)胞克隆，擴(kuò)大培養(yǎng)后提取細(xì)胞基因組DNA，通過PCR方法驗(yàn)證外源基因整合陽(yáng)性，然后利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；倒置顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察；利用MTT法測(cè)試細(xì)胞增殖抑制率；RT-PCR法檢測(cè)NS基因表達(dá)量的變化。 結(jié)果：

3、1.本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出乳腺癌、直腸癌，食管癌、胃癌等多種腫瘤組織中有NS基因表達(dá)，而其相應(yīng)正常組織中沒有檢測(cè)到NS基因的表達(dá)；惡性乳腺腫瘤組織中NS基因的表達(dá)量明顯高于良性乳腺腫瘤，(P＜0.01)；NS基因的表達(dá)量與乳腺腫瘤分級(jí)有關(guān)，分級(jí)越高NS基因的表達(dá)量越高(P＜0.01)；NS基因的表達(dá)量與乳腺腫瘤TNM分期有關(guān)，TNM分期越高NS基因的表達(dá)量越高(P＜0.01)；NS基因的表達(dá)量與乳腺腫瘤有無轉(zhuǎn)移有關(guān)，有轉(zhuǎn)移組NS基因的表達(dá)明顯高于

4、無轉(zhuǎn)移組(P＜0.01)；NS基因的表達(dá)量高低與乳腺腫瘤組織類型無關(guān)(P＞0.05)。2.與對(duì)照組比較，silencer組腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為發(fā)生了顯著的變化，細(xì)胞增殖明顯減慢，細(xì)胞體積變小，形狀變圓，核質(zhì)比變小，胞膜邊緣突起增多，細(xì)胞趨于分化；MTT法顯示silencer組細(xì)胞的增殖速率明顯降低，細(xì)胞增殖抑制率大于80﹪以上；RT-PCR法顯示silencer組細(xì)胞NS基因表達(dá)量較對(duì)照組下降。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出乳腺癌、直腸癌