丙戊酸對體外培養(yǎng)的上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV-,3-血管生成和轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的：探討丙戊酸(valproic acid，VPA)對人卵巢癌細(xì)胞株SKOV<,3>細(xì)胞增殖以及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、上皮性鈣粘附素(E．cadherin)和基質(zhì)金屬蛋白酶2、9(matrix metalloproteinase-2、9)表達(dá)的影響。 方法：將VPA以不同濃度(0、1、2、3、4、5mmol/L)、不同作用時(shí)間(24、48、72h)

2、作用于SKOV<,3>細(xì)胞，在相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化；用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測定細(xì)胞增殖；用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)變化；用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測VEGF、E-cadherin及MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)情況；用流式細(xì)胞學(xué)測定SKOV3細(xì)胞VEGF、E-cadherin及MMP-2和MMP-9蛋白含量。 結(jié)果：(1)倒置顯微鏡下觀察：對照組細(xì)胞生長旺盛，呈叢簇狀排列，細(xì)胞長梭形或多邊形，細(xì)胞形態(tài)飽滿，胞質(zhì)

3、豐富，胞核居于細(xì)胞中央；實(shí)驗(yàn)組當(dāng)用藥濃度為≤2mmol/L時(shí)，細(xì)胞生長未見明顯抑制，3mmol/L以上隨藥物濃度增加，貼壁的正常細(xì)胞數(shù)逐漸減少，這些細(xì)胞多散在或呈小堆排列，細(xì)胞皺縮呈圓形或卵圓形，胞質(zhì)皺縮。 (2)VPA濃度為3～5mmol/L時(shí)，對SKOV3細(xì)胞體外生長均有明顯的抑制作用。作用第3d時(shí)，細(xì)胞抑制率分別為18.92％、32.70％、48.65％，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系。在同一藥物濃度下，細(xì)胞抑制率隨作用時(shí)間的延

4、長有增加趨勢：同一作用時(shí)間，細(xì)胞抑制率隨藥物濃度的增加有增加趨勢。 (3) VPA處理24h后開始出現(xiàn)細(xì)胞周期阻滯，隨濃度增加G<,1>期細(xì)胞百分率增加，同時(shí)伴隨S期細(xì)胞百分率減少，G<,2>、M期變化不明顯。在一定的濃度隨之增加。相同藥物濃度，不同作用時(shí)間所誘導(dǎo)的SubG<,1>百分率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；作用時(shí)間相同，增加藥物濃度，SubG<,1>百分率比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (

5、4)免疫細(xì)胞化學(xué)顯示VEGF、MMP-2及MMP-9蛋白陽性表達(dá)部位主要位于細(xì)胞漿，實(shí)驗(yàn)組(3mmol/L)與對照組(0mmol/L)染色位置一致，但對照組染色強(qiáng)度較強(qiáng)；E-cadherin蛋白陽性信號主要位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，實(shí)驗(yàn)組(3mmol/L)與對照組(Ommol/L)染色位置一致，但染色強(qiáng)度明顯增加。 (5)流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明，在給藥48h后E-cadherin蛋白表達(dá)增強(qiáng)，VEGF、MMP-2及MMP-9蛋白表

6、達(dá)均減弱，對照組與實(shí)驗(yàn)組的熒光指數(shù)有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：(1)VPA對體外培養(yǎng)的上皮性卵巢癌sKOV<,3>細(xì)胞生長有明顯的抑制作用。 (2)VPA抑制SKOV<,3>細(xì)胞生長作用與其誘導(dǎo)的細(xì)胞周期G<,l>阻滯和細(xì)胞凋亡有關(guān)。 (3)VPA能下調(diào)SKOV<,3>細(xì)胞MMP-2及MMP-9的表達(dá)，上調(diào)E—cadherin的表達(dá)，可能具有抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用。 (4)VPA能下