兔組織工程骨膜的構(gòu)建及促進(jìn)細(xì)胞黏附的實驗研究.pdf

1、目的:將經(jīng)成骨誘導(dǎo)的兔骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞 (bone marrow derivedmesenchymal stem cells，BMSCs) 與豬小腸黏膜下層 (small intestinal submucosa，SIS)復(fù)合，構(gòu)建組織工程骨膜修復(fù)骨缺損，將為骨缺損的治療提供一種全新的思路和方法。然而，如何提高種子細(xì)胞和支架材料在體外的復(fù)合率，是構(gòu)建組織工程骨膜研究的主要內(nèi)容之一。本研究著重探索構(gòu)建組織工程骨膜的可行性，及SIS不

2、同的預(yù)濕方法對種子細(xì)胞黏附率的影響，為有效構(gòu)建組織工程化骨膜奠定理論基礎(chǔ)。 方法:取健康新西蘭幼兔骨髓，密度梯度離心法分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化，然后分別與經(jīng)過胎牛血清 (fetal bovine serum，F(xiàn)BS)(實驗組)、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline，PBS)(對照組)預(yù)濕處理的豬小腸黏膜下層(SIS)復(fù)合構(gòu)建組織工程骨膜，體外培養(yǎng)兩周，計算貼附率、測定堿性磷酸酶(a

3、lkaline phosphatase，ALP)活性，并用倒置顯微鏡、掃描電鏡觀察細(xì)胞在生物材料上附著及生長情況。 結(jié)果:經(jīng)物理和化學(xué)處理的SIS純度高，孔隙多，膠原纖維未受損；BMSCs在SIS材料上生長、粘附、增殖并能長入材料的孔隙內(nèi)。倒置顯微鏡及掃描電鏡均顯示實驗組細(xì)胞比對照組更易黏附，更易伸展，細(xì)胞貼附率及ALP活性均高于對照組(P<0.01)。 結(jié)論:SIS的細(xì)胞相容性良好，不影響B(tài)MSCs的形態(tài)，生長和功能表