人睪丸特異的磷酸吡哆醛激酶變異剪接體PKH-T表達(dá)研究.pdf

1、目的:在睪丸基因芯片與成人、胚胎睪丸及精子探針雜交發(fā)現(xiàn)PKH-T基因的基礎(chǔ)上,研究其表達(dá).方法:對(duì)目的克隆進(jìn)行測(cè)序,得到其全長(zhǎng)序列.利用生物信息學(xué)的方法分析測(cè)序結(jié)果.通過(guò)RT-PCR的方法檢測(cè)出其在不同人體組織、不同生理時(shí)期男性睪丸、不同臨床病理診斷的男性不育患者睪丸組織中表達(dá)的差異.結(jié)果:通過(guò)如上實(shí)驗(yàn)克隆一種新的人類睪丸特異全長(zhǎng)基因PKH-T.PKH-T的cDNA全長(zhǎng)1069bp.此cDNA序列被輸入到Genbank,登錄號(hào)為AY30

2、3972.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析顯示PKH-T包含幾乎所有PKH基因的保守基序.同源比對(duì)顯示由PKH-T的開(kāi)放閱讀框架(ORF)推導(dǎo)出的239個(gè)氨基酸與人類基因PKH(U89606)表達(dá)的蛋白質(zhì)同源.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PKH-T高度特異地在睪丸組織表達(dá),并且信號(hào)強(qiáng)度較高.對(duì)PKH和PKH-T在不同發(fā)育階段的男性睪丸中不同表達(dá)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),PKH-T在成人睪丸和精子中有表達(dá),而PKH在成人睪丸、胚胎睪丸、老年人的睪丸中有表達(dá).用RT-PCR的方法研究發(fā)