間質(zhì)及間質(zhì)α-SMA表達(dá)與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是嚴(yán)重危害人類健康的常見惡性腫瘤之一,其在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率已居2～3位。在西方發(fā)達(dá)國家中,已經(jīng)占惡性腫瘤死亡人數(shù)的第2位,僅次于肺癌。在我國現(xiàn)階段惡性腫瘤死因順位中居第4位左右,隨著我國居民生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變,其發(fā)病率和死亡率還會逐年上升。盡管結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制研究已取得很大進(jìn)展,但其對結(jié)直腸癌的預(yù)后還沒有發(fā)生實(shí)質(zhì)性影響,如何提高評估患者預(yù)后的準(zhǔn)確性依然是一個現(xiàn)實(shí)而又嚴(yán)峻的問題。上皮間質(zhì)相互作用在腫瘤發(fā)生發(fā)展中

2、的作用是近年來的一個研究熱點(diǎn),越來越多的研究證實(shí),腫瘤細(xì)胞生存的間質(zhì)微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。間質(zhì)微環(huán)境主要由間質(zhì)細(xì)胞以及ECM構(gòu)成。間質(zhì)細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞以及各種炎細(xì)胞等,其中成纖維細(xì)胞是間質(zhì)細(xì)胞的主要類型,腫瘤細(xì)胞與這些間質(zhì)細(xì)胞的相互作用在腫瘤的形成與演進(jìn)過程中扮演了重要角色。腫瘤細(xì)胞生存的間質(zhì)微環(huán)境不同于正常組織,這種間質(zhì)被稱為“反應(yīng)性間質(zhì)”,“反應(yīng)性間質(zhì)”的特點(diǎn)是:1、ECM成分發(fā)生改

3、變,2、微血管密度增加,3、炎細(xì)胞大量浸潤和成纖維細(xì)胞增多并被激活。腫瘤間質(zhì)的成纖維細(xì)胞是活化的成纖維細(xì)胞,兼有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的特點(diǎn),大多數(shù)學(xué)者稱其為肌成纖維細(xì)胞。肌成纖維細(xì)胞胞漿中豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、應(yīng)力纖維、細(xì)胞膜上的纖維連接復(fù)合體,構(gòu)成其特征性的超微結(jié)構(gòu)。它表現(xiàn)基于真核細(xì)胞的細(xì)胞骨架系統(tǒng),常通過免疫組織化學(xué)染色,顯示其中的α-SMA、vimentin、desmin等作為對肌成纖維細(xì)胞進(jìn)行分類和識別的標(biāo)志,α-SMA是公認(rèn)的肌

4、成纖維細(xì)胞的通用標(biāo)記物。肌成纖維細(xì)胞同時具有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的某些功能,并能通過分泌多種物質(zhì)參與胚胎發(fā)育、損傷修復(fù)、免疫、炎癥、腫瘤等過程。腫瘤周邊的肌成纖維細(xì)胞可能通過旁分泌作用(間質(zhì)-上皮相互作用),引起腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、基質(zhì)成分的改變、血管生成等而促進(jìn)或抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。盡管間質(zhì)對于腫瘤發(fā)生和發(fā)展的作用是明確的,但其作用的機(jī)制卻相當(dāng)復(fù)雜,至今仍不清晰,因此,人們?nèi)栽诓粩噙M(jìn)行研究和探索。基于以上目的,我們選取了腫瘤組織中實(shí)質(zhì)

5、間質(zhì)比例、間質(zhì)面積、α-SMA陽性面積和α-SMA陽性面積比等指標(biāo)或標(biāo)記物,期望通過對臨床病例的回顧性研究,借助統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,發(fā)現(xiàn)其中存在的與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)的信息。我們收集了浙江省蕭山區(qū)人民醫(yī)院、浙江大學(xué)第一附屬醫(yī)院和浙江省腫瘤醫(yī)院1990～2000年間檔案資料完整的全部經(jīng)手術(shù)治療并獲完整隨訪結(jié)果的結(jié)直腸癌患者160例。所有標(biāo)本均經(jīng)10％中性甲醛固定、石蠟包埋后,4μm厚切片,行EnVision法免疫組織化學(xué)染色。利用計(jì)算機(jī)圖像分

6、析技術(shù)獲取所有切片的研究數(shù)據(jù),采用SPSS12.0(forwindows)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。資料組間差異比較采用t檢驗(yàn)、x~2分析或單因素方差分析;患者預(yù)后分析采用COX比例風(fēng)險模型單因素和多因素分析;生存率曲線采用Kaplan-Meier法繪制,組間差異采用log-rank檢驗(yàn);5年累積生存率采用壽命表法獲得。以P<0.05為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,所有計(jì)量數(shù)據(jù)以((?)±s)形式表示。第一部分選取結(jié)直腸癌間質(zhì)面積和實(shí)質(zhì)間質(zhì)比作為研究指

7、標(biāo)。利用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測α-SMA表達(dá)的病理學(xué)切片,通過計(jì)算機(jī)圖像分析,測量間質(zhì)面積及實(shí)質(zhì)間質(zhì)比在結(jié)直腸正常粘膜和腫瘤組織中的變化并進(jìn)一步探討其預(yù)后意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在160例結(jié)直腸癌標(biāo)本和18例對照正常結(jié)直腸粘膜組織中,間質(zhì)面積的平均值分別為4739991.14±1234931.84和3334058.83±708003.98;實(shí)質(zhì)間質(zhì)比的平均值為1.0558±0.8452和1.7266±0.6428;腫瘤組織的間質(zhì)面積比

8、正常粘膜的間質(zhì)面積明顯增大,同時實(shí)質(zhì)間質(zhì)比明顯降低,兩者均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。進(jìn)一步比較間質(zhì)面積或?qū)嵸|(zhì)間質(zhì)比在結(jié)直腸癌中的分布與各臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn),間質(zhì)面積或?qū)嵸|(zhì)間質(zhì)比在患者的性別、年齡、腫瘤的發(fā)病部位、腫瘤芽數(shù)量、組織學(xué)分級等臨床病理參數(shù)不同分組之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異(P>0.05),但是在腫瘤的不同組織學(xué)類型、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期之間存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異(P<0.05)。

9、Kaplan-Meier法分析表明,間質(zhì)面積或?qū)嵸|(zhì)間質(zhì)比、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫瘤芽數(shù)量是判斷結(jié)直腸癌預(yù)后的指標(biāo)(P<0.05,log-rank檢驗(yàn))。同時我們還觀察到各組間在5年累積生存率上也存在著明顯的差異。最后進(jìn)行COX比例風(fēng)險模型多因素分析表明:間質(zhì)面積或?qū)嵸|(zhì)間質(zhì)比、TNM分期、腫瘤芽數(shù)量、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌的獨(dú)立預(yù)后因素。提示間質(zhì)面積或?qū)嵸|(zhì)間質(zhì)比是判斷結(jié)直腸癌預(yù)后的一個獨(dú)立指標(biāo)。第二部分選取腫瘤間質(zhì)肌成

10、纖維細(xì)胞作為研究對象,經(jīng)α-SMA標(biāo)記,計(jì)算腫瘤間質(zhì)α-SMA染色陽性面積和其所占間質(zhì)面積的比例,探討結(jié)直腸癌間質(zhì)中肌成纖維細(xì)胞的分布特點(diǎn)及其與腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn):α-SMA陽性物質(zhì)在對照正常粘膜中主要分布于粘膜中下部,以線狀圍繞在固有層腺體周圍,底部與粘膜肌層形成連接。在結(jié)直腸癌標(biāo)本中,所有標(biāo)本均有表達(dá),除間質(zhì)血管壁、平滑肌組織外,α-SMA陽性物質(zhì)廣泛分布于間質(zhì)各部分,呈廣泛淡染、局部強(qiáng)染等不確定形式。α-SMA陽性面積

11、及陽性面積比在腫瘤組織及正常粘膜中的表達(dá)均數(shù)分別為864481.18±496634.39和283663.15±153710.86,0.1901±0.1056和0.0874±0.0503;腫瘤組織中明顯增高,兩者均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。進(jìn)一步分析α-SMA陽性面積及陽性面積比與結(jié)直腸癌各臨床病理參數(shù)的關(guān)系時發(fā)現(xiàn),α-SMA陽性面積(P<0.05)及陽性面積比(P<0.01)在腫瘤的不同組織學(xué)類型分組之間均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;

12、在患者的年齡、性別、腫瘤的發(fā)病部位、浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等不同分組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。分層x~2分析顯示,間質(zhì)α-SMA陽性面積比高的分組中,TNM分期Ⅰ/Ⅱ期以及未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例所占比例較高,組間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。最后進(jìn)行的α-SMA陽性面積及陽性面積比與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系分析顯示,經(jīng)壽命表法、Kaplan-Meier法、COX比例風(fēng)險模型單因素分析,無論5年累積生存率、生存曲

13、線還是生存預(yù)后風(fēng)險都沒有發(fā)現(xiàn)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。1、結(jié)直腸癌與結(jié)直腸正常粘膜在間質(zhì)面積或?qū)嵸|(zhì)間質(zhì)比上存在明顯差異,結(jié)直腸癌間質(zhì)面積明顯增加。2、結(jié)直腸癌間質(zhì)面積或?qū)嵸|(zhì)間質(zhì)比與結(jié)直腸癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期以及組織學(xué)類型有關(guān),并且是結(jié)直腸癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo),間質(zhì)面積較實(shí)質(zhì)間質(zhì)比更有預(yù)后價值。3、結(jié)直腸癌與結(jié)直腸正常粘膜間質(zhì)中肌成纖維細(xì)胞分布存在明顯差異,結(jié)直腸癌間質(zhì)肌成纖維細(xì)胞明顯增加。4、結(jié)直腸癌間質(zhì)肌成纖維