肝癌抗血管形成和放射治療的實驗與臨床研究.pdf

1、目的 實體性腫瘤在其發(fā)展過程中都有大量的腫瘤新生血管形成，血管形成是腫瘤細胞生長、侵襲和轉移的基礎。原發(fā)性肝細胞癌是臨床常見惡性腫瘤之一，發(fā)病隱匿，復發(fā)和轉移率高，對傳統(tǒng)治療方法反應差，預后不佳；腫瘤血管形成活躍也是其突出的特征。血管形成是在多種生長因子的調控下實現(xiàn)的，其中血管內皮生長因子(VEGF)是血管形成的主要調控因子，它能促進內皮細胞分裂、增殖和血管構建，誘導血管形成；抑制內皮細胞凋亡；增加新生血管通透性；誘導細胞外基質

2、和基底膜分解酶表達升高或活性增強。VEGF在腫瘤血管形成和瘤細胞侵襲、轉移過程中具有至關重要的作用。 肝癌的傳統(tǒng)治療方法有手術切除、放射治療和介入等，手術是最有效的根治性治療措施，但臨床上大部分病人就診時已失去手術治療機會。肝癌對化療不敏感，肝癌細胞對放療也不敏感，而肝臟卻是放射敏感器官。隨著放療設備和技術的進步，肝癌的放療療效有了極大的提高，但肝癌的高轉移特性制約了作為局部治療措施的放療的作用，放療后復發(fā)和轉移仍是導致患者死亡

3、的主要原因。因而尋求更有效的治療方法延長肝癌患者的生存期，是臨床迫切的需要。 有大量實驗研究表明，抗血管形成治療能抑制多種腫瘤生長，但其作用是暫時的。放療與抗血管形成治療聯(lián)合對一些腫瘤的協(xié)同抑制作用已得到實驗證實，但聯(lián)合治療肝癌的研究未見報道。我們利用肝癌血管形成豐富的特點，應用外照射放療與抗VEGF抗體(VEGFmAb)聯(lián)合治療肝癌裸鼠移植瘤，觀察聯(lián)合治療對腫瘤生長和血管形成的抑制作用，初步探討它們協(xié)同抑制腫瘤生長和抗血管形成

4、的作用機制。同時檢測肝癌臨床手術切除標本中與血管形成有關的VEGF、缺氧誘生因子1a(HIF-1a)和基質金屬蛋白酶2(MMP-2)的表達，了解它們與肝癌臨床發(fā)病特征及術后轉移、復發(fā)和生存時間的聯(lián)系，為新的肝癌治療策略提供部分理論依據(jù)。 方法 抗血管形成治療劑采用鼠抗人VEGF165中和性單克隆抗體(抗VEGFmAb)。人肝癌細胞株SMMC-7721實驗室繁殖傳代，收集指數(shù)生長期細胞，以生理鹽水定容細胞密度為2×107個

5、/ml，取0.2ml(含4×106個細胞)懸液種植于裸小鼠右后肢皮下。待皮下腫瘤直徑長至5mm左右時，將25只腫塊大小較為一致的動物隨機分為5組：單純放療20Gy組(A組)、放療20Gy+抗體組(B組)、放療30Gy+抗體組(C組)、單純抗體組(D組)和對照組(E組)，每組動物5只。抗VEGFmAb按25μg/只/次腹腔注射給藥，隔日1次，共6次；第4次給藥后放療。放療采用6MeV電子線，劑量率4Gy/min，全部放射劑量一次性給予。治

6、療開始后觀察記錄腫瘤生長情況，隔日測量1次腫瘤的最大長徑和短徑，求體積。治療結束后2周處死動物，稱瘤重。取腫瘤組織以福爾馬林固定、石蠟包埋、切片，免疫組化SABC法測VEGF、HIF-1a、MMP-2和CD31的表達，CD31作為微血管密度(MVD)的指標，一抗為兔源性多克隆抗體，1∶100稀釋，二抗是生物素化羊抗兔抗體，DAB染色，依據(jù)陽性細胞染色程度和細胞染色率的評分作為判斷陽性染色標準；DNA末端原位標記染色法測凋亡細胞，計算凋亡

7、指數(shù)。具體操作均按說明書進行。 臨床部分，取55例經(jīng)病理證實的原發(fā)性肝細胞癌組織切片，免疫組化方法檢測腫瘤組織中VEGF、HIF-1a和MMP-2的表達程度和表達率。隨訪術后患者生存時間和復發(fā)及轉移情況，分析患者臨床發(fā)病特征、VEGF、HIF-1a和MMP-2與術后復發(fā)、轉移及生存時間的聯(lián)系。 統(tǒng)計數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件分析。 結論 1.VEGF是肝癌血管形成的關鍵生長因子，放療或抗VEGFmAb單獨

8、治療抑制移植瘤生長和抗血管形成作用有限。放療和抗VEGFmAb聯(lián)合發(fā)揮協(xié)同抑瘤效應，協(xié)同作用的機制是抗VEGFmAb阻斷血管形成、誘導瘤細胞和血管內皮細胞凋亡、對抗放療誘導的腫瘤保護，起到了放射增敏作用；而放療的細胞毒作用彌補了抗VEGFmAb不能直接殺滅腫瘤細胞的不足。 2.VEGF、HIF-1a和MMP-2與臨床肝癌轉移或復發(fā)、腫瘤生長密切相關，是影響肝癌術后總生存時間及無瘤生存時間的關鍵因素之一。VEGF、HIF-1a和M

9、MP-2的表達互相促進。 3.本文首次應用外照射放療與抗血管形成劑(抗VEGFmAb)治療肝癌裸小鼠移植瘤，證實了兩種治療措施的協(xié)同抗腫瘤生長效應，并初步探討了兩者發(fā)揮協(xié)同效應的機制，為新的肝癌治療策略提供了部分實驗理論依據(jù)。臨床肝癌組織血管形成豐富，放療聯(lián)合抗血管形成治療肝癌的前景遠大。 4.抗血管形成治療腫瘤的研究仍處于起步階段，與放療聯(lián)合治療肝癌則罕有報道。在放療劑量的選擇、劑量分割分式、抗血管形成劑的劑量及與放療