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文檔簡介
1、目的:哺乳動物的視網膜包含七種細胞(視錐細胞,視桿細胞,水平細胞,雙極細胞,無長突細胞,節(jié)細胞和Müller細胞)。它們共同起源視網膜神經祖細胞,但是它們的產生在時間及空間上卻是有著嚴格的順序。視網膜神經節(jié)細胞是第一個產生的細胞類型,但是其形成的機制目前尚不明了。轉錄因子FEZF2在大腦投射神經元發(fā)育過程中具有著命運決定和軸突導向作用,但是在視網膜中還未有研究。本課題的研究目的是確定轉錄因子FEZF2在視網膜節(jié)細胞中的表達和功能。
2、> 方法:我們用原位雜交技術來檢測Fezf2在視網膜的表達情況,用免疫熒光技術來檢測其它視網膜標記性基因的表達情況。對于Fezf2的功能實驗,我們采用基因胚胎電轉的方法在E13.5的視網膜中來上調和下調Fezf2。并用流式細胞術分選出轉染質粒的細胞,通過定量PCR檢測候選基因的表達。
結果:我們觀察到Fzf2表達在E16.5的視網膜前體細胞層中,而在節(jié)細胞層沒有檢測到陽性信號。而Fezf2的反鏈基因和Fezf2的直接
3、抑制基因——Tbr1則都表達在E16.5及以后的節(jié)細胞層。當我們在視網膜上過表達Fezf2后,發(fā)現(xiàn)部分轉染了Fzef2的節(jié)細胞不能遷移至節(jié)細胞層,這提示Fezf2的下調可能是節(jié)細胞遷移所必需的。另外,在過表達Fezf2的節(jié)細胞中幾乎沒有發(fā)現(xiàn)ISLET1,MATH5和DLX1/2的表達,且過表達Fezf2的節(jié)細胞的軸突也不能向上丘發(fā)出投射。與之相反,我們抑制了Fezf2的表達后發(fā)現(xiàn),除了BRN3B的表達受到抑制之外,其它的節(jié)細胞標記性基因
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