人體血管平滑肌大電導鈣激活鉀通道基因表達的老年性變化.pdf

1、目的：對老年組和青年組人體腸系膜動脈平滑肌細胞上編碼大電導鈣激活鉀通道BKCa的基因KCNMB1表達水平進行相對定量分析，探討血管老化過程中大電導鈣激活鉀通道基因表達變化及其意義。 方法：(1)研究對象：選取因消化道疾病需行腹部手術(shù)的住院患者33例。老年組17例，年齡60～81歲，男9例，女8例，其中膽石癥10例，消化性潰瘍7例。青年組16例，年齡30～40歲，男8例，女8例，其中膽石癥7例，消化性潰瘍9例。所有研究對象均無高血

2、壓病、冠心病、糖尿病及外周血管硬化性疾病等，術(shù)前未使用對血管舒縮功能有影響的藥物，術(shù)中經(jīng)探查無腸道血管病變。(2)提取2組人體腸系膜動脈平滑肌細胞的總RNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計測定260nm、280nm的光密度值(OD值)及其比值，判定其純度。(3)采用MBI公司的RevertAidTMFristStrandcDNASynthesisKit并嚴格按說明反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA。(4)對反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行常規(guī)PCR，檢測目的基因

3、的cDNA片斷的質(zhì)量。(5)熒光定量聚合酶鏈反應(RQ-PCR)檢測目的基因KCNMB1在人體腸系膜動脈平滑肌中的表達。用看家基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參照對KCNMB1的cDNA起始濃度進行標化，對標化結(jié)果進行分析。每個樣品的GAPDH和KCNMB1分管同板相同條件下進行擴增反應，每次反應均作空白對照(不加模板)排除污染可能。每個樣品重復三次，獲得的cDNA相對起始濃度結(jié)果取均值。 結(jié)果：(1)老年組平均年

4、齡為(71.47±5.05)歲，青年組平均年齡為(32.38±3.67)歲，兩組年齡差異有顯著性意義(t=-25.303,P=0.00,P＜0.05)；老年組與青年組在性別(χ2=0.029，P=0.866，P＞0.05)及所患消化道疾病類別(χ2=0.75，P=0.387，P＞0.05)方面均差異無顯著性。(2)提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后可見28S、18S、5S3條帶，無DNA污染條帶和明顯降解條帶，OD260/OD280均在1

5、.8～2.0之間，說明總RNA純度較高。(3)常規(guī)PCR結(jié)果：經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳后可見129bp清晰亮度不同的條帶，說明引物設(shè)計合成無誤，KCNMB1的cDNA模板可用于熒光定量PCR。(4)熒光定量PCR結(jié)果：老年組與青年組的KCNMB1/GAPDH定量比值分別為(0.737±0.369)％和(1.169±0.424)％，老年組較青年組降低，兩組差異有顯著性意義(t=3.133，P=0.004，P＜0.01)。 結(jié)論：血