中心體異常和食管癌發(fā)生相關性的實驗研究.pdf

1、背景與目的:中心體(centrosome)是一個微小的細胞器。Boveri作為中心體的先驅(qū)研究者首先將這個微小的細胞器置于聚光燈下,一個世紀以來,中心體這一微小的細胞器令無數(shù)細胞生物學家著迷。中心體由一對中心粒(centrioles)和中心粒周圍物質(zhì)(pericentriolar material, PCM)組成。中心粒由九組三聯(lián)體(或雙聯(lián)體,或單體,取決于細胞類型)微管組成,形成開放的桶狀結(jié)構(gòu),每組三聯(lián)體微管相互之間斜向排列,略似風輪

2、。各亞微管又由13根直徑約4.5nm的原纖維組成,中心粒內(nèi)無中央微管,也無特殊的臂。中心粒的直徑約為100-150nm,長度約為100-400nm,成對并彼此相互垂直排列。中心粒周圍環(huán)繞著中心粒周圍物質(zhì)(pericentriolar material, PCM)和高電子密度物質(zhì)(electron-dense material)。中心體的主要功能是作為主要的微管組織中心(microtubule organizing centres, MT

3、OCs)。作為主要的MTOCs,中心體在維持細胞有絲分裂的忠實性和細胞極性上起著重要的作用。當中心體的結(jié)構(gòu)和功能異常時,可引起細胞有絲分裂異常和細胞極性紊亂,并導致細胞染色體不穩(wěn)(chromosome instability, CIN),最終導致惡性腫瘤的發(fā)生。本項實驗通過對食管癌不同階段中心體結(jié)構(gòu)異常的研究,來探討中心體結(jié)構(gòu)異常在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用和意義,為臨床醫(yī)學提供診斷和治療的基礎理論依據(jù)。
　　材料與方法:從所收取

4、的食管癌標本中隨機選取同1例標本中同時具有食管癌不同階段的標本(即同時具有癌旁食管正常粘膜,食管不典型增生,食管原位癌和食管浸潤癌4個階段)進行中心體特性的詳細研究。一抗為抗中心體周圍蛋白多克隆抗體(Polyclonal Antibody against Pericentrin),二抗分別為生物素化山羊抗兔 IgG抗體(Biotinylation Goat Anti-Rabbit IgG Antibody)和FITC標記抗兔 IgG抗體

5、(Anti-Rabbit IgG Antibody, FITC Labeled)。中心體分別采用免疫組化(SABC法)和間接免疫熒光法進行染色。各實驗組陽性染色結(jié)果經(jīng)SigmaScan Pro5圖像分析軟件對圖像進行處理后,以中心體面積(areas)和體積(volumes)值作為統(tǒng)計數(shù)據(jù)輸入SPSS13.0 for Windows統(tǒng)計軟件包,進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計,各實驗組中心體面積(areas)和體積(volumes)值以均數(shù)和標準差( x±s

6、)來表示。食管浸潤癌組、食管原位癌組、食管不典型增生組、癌旁食管正常粘膜組之間細胞中心體結(jié)構(gòu)上是否存在差異采用配對樣本 T檢驗(Paired-Samples T Test)和單向方差分析(Analysis of One-way Variance)進行統(tǒng)計分析。中心體異常和食管癌發(fā)生之間是否存在相關性采用Spearman等級相關分析(Spearman Rank Correlation Analysis)進行統(tǒng)計分析。所有的統(tǒng)計分析都采用S

7、PSS13.0 for Windows統(tǒng)計分析軟件進行,統(tǒng)計數(shù)據(jù)用x±s表示,P﹤0.05有統(tǒng)計學意義,P﹤0.01有高度統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:通過相關的統(tǒng)計學分析,其結(jié)果如下:癌旁食管正常粘膜組和食管浸潤癌組細胞之間中心體結(jié)構(gòu)異常具有高度統(tǒng)計學意義(P﹤0.01),Spearman等級相關統(tǒng)計分析中心體結(jié)構(gòu)異常和食管癌發(fā)生之間具有高度統(tǒng)計學意義(P﹤0.01);癌旁食管正常粘膜組和食管原位癌組細胞之間中心體結(jié)構(gòu)異常具有高度統(tǒng)計

8、學意義(P﹤0.01),Spearman等級相關統(tǒng)計分析中心體結(jié)構(gòu)異常和食管原位癌發(fā)生之間具有高度統(tǒng)計學意義(P﹤0.01);癌旁食管正常粘膜組和食管不典型增生組細胞之間中心體結(jié)構(gòu)異常無統(tǒng)計學意義(P﹥0.05),Spearman等級相關統(tǒng)計分析中心體結(jié)構(gòu)異常和食管不典型增生之間無統(tǒng)計學意義(P﹥0.05);方差統(tǒng)計分析具有高度統(tǒng)計學意義(P﹤0.01),不同階段中心體結(jié)構(gòu)具有顯著性差異,Spearman等級相關統(tǒng)計分析中心體結(jié)構(gòu)異常和