SEB基因的膜片電極支撐雙層類脂膜核酸傳感器研究.pdf

1、由金黃色葡萄球菌腸毒素B基因所編碼的B型腸毒素(SEB)是引起食物中毒的重要毒素，也是重要的生物戰(zhàn)劑之一，本文以SEB基因?yàn)闄z測目標(biāo)基因，以固定有特異識(shí)別SEB基因的寡核苷酸探針的雙層類脂膜(BLMs)為敏感分子識(shí)別元件；利用膜片鉗放大器系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞膜上離子通道跨膜電流變化極其靈敏的特點(diǎn)，研究并構(gòu)建一種新型的膜片電極支撐BLMs核酸傳感器，對(duì)SEB基因進(jìn)行快速、靈敏和特異的檢測。主要研究內(nèi)容如下： 1．優(yōu)化了成膜液的組成及配比，研

2、究了新型膜片電極支撐的雙層類脂膜的制備。用膜片鉗系統(tǒng)記錄BLMs在膜片電極尖端形成的I-V直線圖并可在光學(xué)顯微鏡下(10x40)觀察成膜后的情況。用在膜中嵌入短桿菌肽離子通道蛋白的方法，對(duì)所制備BLMs的真實(shí)性進(jìn)行確證。 2．利用生物信息學(xué)方法設(shè)計(jì)了對(duì)SEB基因有良好特異互補(bǔ)配對(duì)的寡核苷酸探針，采用直鏈烷烴鏈C12對(duì)其5’端進(jìn)行修飾(C12-ssDNA)，可提高探針在BLMs上的固定能力。 3．研究了序列不同的寡核苷酸探

3、針及不同濃度C12-ssDNA探針在膜片電極支撐BLMs上固定所產(chǎn)生的電流響應(yīng)情況。E12修飾過的探針響應(yīng)遠(yuǎn)較未修飾的良好。50mV靜電位下，電流響應(yīng)值和不同濃度的寡核苷酸探針呈正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)選定以濃度為273．65ng／mL的Ci2-ssDNA固定于BLMs上作為膜片電極支撐BLMs核酸傳感器的生物敏感元件。傳感器測得的電流與施加階躍電壓呈良好的線性關(guān)系。 4．對(duì)膜片電極支撐BLMs核酸傳感器檢測SEB基因進(jìn)行研究。傳感器可定量