PH Ⅱ-7作用模式和機理研究.pdf

1、多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)是指腫瘤細胞對一種化療藥物出現(xiàn)耐藥的同時，對其他結構不同、作用靶位不同的化療藥物亦產(chǎn)生抗藥性，是腫瘤化療失敗和復發(fā)的根源。多藥耐藥的產(chǎn)生是多機制作用多基因參與的復雜過程，ATP結合盒(ATP Binding Cassette，ABC)家族基因過表達已被證明是MDR產(chǎn)生的重要原因，MDR1是ABC家族中最早被發(fā)現(xiàn)，影響最廣泛，最為重要的MDR相關基因，圍繞MDR1的MDR機理研究

2、及逆轉MDR研究的重要性日益凸顯。 多藥耐藥作為腫瘤化療中的常見現(xiàn)象，當今仍然是化療失敗和腫瘤病人死亡的最主要原因之一。針對腫瘤MDR的產(chǎn)生過程，應用多藥耐藥逆轉劑是解決腫瘤MDR的主要手段。經(jīng)過二十多年的開發(fā)研究，已發(fā)現(xiàn)大量具有MDR逆轉活性的化合物，主要包括：鈣通道阻滯劑(維拉帕米及其衍生物)、鈣調(diào)蛋白抑制劑(噻吩嗪類化合物)、免疫抑制劑(環(huán)孢菌素A及其衍生物)、類固醇和激素類似物(黃體酮、甲地孕酮)等。但這類逆轉劑的毒副作

3、用也使其臨床應用受到限制。 中藥當歸龍薈丸可有效治療有效治療慢性粒細胞性白血病，我室以其有效成分靛玉紅為模板，經(jīng)定量構效關系研究，從合成的幾十種衍生物中篩選出PHⅡ—7。本實驗是對其活性和作用機理進行研究。首先，在殺傷活性試驗中，我們通過MTT實驗發(fā)現(xiàn)PHⅡ—7對K562細胞及其耐藥株K562/A02均有明顯的殺傷作用，且IC50相近。而K562/A02對作為陽性對照的阿霉素的IC50值則比K562高出近百倍應用表達譜芯片AFF

4、YMETRIX Genome u133 plus2.0輔以SYBR GREEN REALTIME PCR驗證，研究PHⅡ—7作用前后的前述兩細胞系發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典多藥耐藥基因MDR1表達量下調(diào)，與其磷酸化和功能密切相關的基因PKCA顯著下調(diào)。與S期細胞周期阻滯、凋亡、細胞衰老密切相關的P21，CHK1等基因顯著上調(diào)。激光共聚焦成像發(fā)現(xiàn)PHⅡ—7作用后K562/A02細胞內(nèi)ADM蓄積明顯增加，流式細胞術發(fā)現(xiàn)這種增加呈時間依賴性。凋亡和周期實驗證

5、明PHⅡ—7作用后細胞周期發(fā)生阻滯，細胞凋亡增加。PHⅡ—7可以抑制經(jīng)典耐藥基因MDR1的表達，并可顯著抑制PKCA的表達，通過使用SiRNA沉默PKCA的表達發(fā)現(xiàn)，K562/A02細胞中PKCA的下調(diào)可導致c—FOS，c—JUN和MDR1基因的顯著下調(diào)，提示PHⅡ—7通過PKCA—AP1—MDR1信號通路下調(diào)MDR1基因的表達，從而逆轉耐藥腫瘤細胞的耐藥狀態(tài)。并通過作用于有關基因導致細胞周期阻滯，并誘導凋亡。PHⅡ—7同時具備了內(nèi)在腫