鵝細小病毒NS1基因植物真核表達載體的構建及向苜蓿中的轉化.pdf

1、小鵝瘟(Goose plague，GP)是由鵝細小病毒(Goose parvovirus，GPV)引起的一種主要侵害4～10日齡雛鵝的急性或亞急性敗血性傳染病，是危害養(yǎng)鵝業(yè)最嚴重的傳染病之一。GPV屬細小病毒科(Parvoviridae)、細小病毒屬(Parvovirus)成員。含有兩個開放閱讀框，左側閱讀框編碼非結構蛋白NS1、NS2，右側閱讀框編碼結構蛋白VP1、VP2及VP3。其中NS1在病毒毒性、病毒復制及調節(jié)基因的表達方面發(fā)揮

2、了重要的作用。試驗通過對鵝細小病毒非結構蛋白NS1基因轉化苜蓿的探索，研究植物轉基因技術在表達鵝細小病毒抗原中的應用，為進一步研究鵝細小病毒NS1蛋白的生物學特性、揭示鵝細小病毒致病機理及研制口服疫苗提供科學依據。 根據Genebank上發(fā)表的GPVB株基因組核苷酸序列設計一對特異性引物，PCR擴增出鵝細小病毒非結構蛋白NS1全長基因，約2022bp，將其克隆到含有CaMV35S啟動子的植物表達載體pBI121中，轉化大腸桿菌J

3、M109感受態(tài)細胞，構建了植物表達載體pBI121-NS1，利用改進的熱激法將其導入農桿菌LBA4404，構建NS1植物雙元表達載體，建立了農桿菌介導法轉化苜蓿的載體系統(tǒng)。 選用紫花苜?！敖鸹屎蟆?～5天的子葉、下胚軸和15天左右的幼嫩葉片為材料，誘導篩選出良好的胚性愈傷組織，以該愈傷組織為受體，通過葉盤轉化法將GPV的NS1基因轉化苜蓿，卡那霉素抗性篩選后，獲得抗性植株52株。提取抗性植株葉片基因組DNA做PCR特異性擴增，擴