不同代次兔髓核細(xì)胞中Ⅱ型膠原和SOX9的表達(dá)和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]:通過(guò)培養(yǎng)不同代次兔髓核細(xì)胞，檢測(cè)其Ⅱ型膠原和SOX9的含量變化，觀察其細(xì)胞生長(zhǎng)規(guī)律，從而尋找出生物學(xué)性狀最佳的細(xì)胞代次作種子細(xì)胞。
　　[方法]:取2-3月齡新西蘭大白兔8只，空氣栓塞致死后在無(wú)菌條件下取出胸、腰椎段髓核，髓核組織以0.2％Ⅱ型膠原酶充分消化后進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。將原代細(xì)胞作為對(duì)照組（A組，n=8），傳代后的2、3、4、5代細(xì)胞分別為B、C、D、E組，倒置相差顯微鏡下觀察不同代次兔髓核細(xì)胞的形態(tài)變化，采用M

2、TT法檢測(cè)細(xì)胞OD值，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;RT-PCR和免疫組化法檢測(cè)不同代次細(xì)胞Ⅱ型膠原和SOX9的表達(dá)。
　　[結(jié)果]:原代細(xì)胞（A組）生長(zhǎng)緩慢，梭形為主，20-30天達(dá)80％融合可傳代;B組生長(zhǎng)速度最快，7-10天可達(dá)80％融合傳代，C、D、E組髓核細(xì)胞生長(zhǎng)速度依次減慢，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則。RT-PCR和免疫組化法檢測(cè)可知A組和B組Ⅱ型膠原及SOX9的表達(dá)明顯高于C、D、E三組(P＜0.05)，A、B組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.0