雌激素加速創(chuàng)面愈合作用機制的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 觀察卵巢切除對大鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面愈合情況的影響，以及雌激素受體在大鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面愈合過程中的表達情況；進而觀察雌激素受體在表皮干細胞表面的表達情況，研究雌激素對離體培養(yǎng)的表皮干細胞增殖遷移活性的影響，探討雌激素及其受體在創(chuàng)面愈合過程中的作用及相關分子機制。
　　 方法：
　　 1.動物實驗 2月齡雌性wistar大鼠40只，隨機分組，分為假手術組(10只)，去卵巢組(15只)和單純手術組（15

2、只）。8周后，在背部制成全層全損皮膚創(chuàng)傷愈合模型，分別于傷后1、3、7、14和21d取材。常規(guī)組織學觀察皮膚愈合過程，及記錄三組各個時間點的創(chuàng)面面積和傷腔容積，并計算創(chuàng)面愈合率，以及免疫熒光觀察雌激素受體的表達情況。
　　 2.細胞實驗采用密度梯度離心法培養(yǎng)正常成人皮膚的表皮干細胞（hESCs），流式細胞儀檢測培養(yǎng)第二代細胞整合素?1，CK10，CK14，CK19抗原表達以鑒定ESCs。實驗分3組：(1):表皮干細胞專用培養(yǎng)基(

3、即Epilif培養(yǎng)基)中加入乙烯雌酚(Diethylstilbestrol)配成濃度為0.1nmol/l(雌激素組)；(2):表皮干細胞專用培養(yǎng)基中加入雌激素受體拮抗劑雷洛西芬(Raloxifene hydrochloride)配成濃度為10nmol/l（雌激素受體阻斷劑組）；(3): 單純ESCs培養(yǎng)組（空白組）。應用流式細胞儀檢測3組的ER-?的抗原表達情況。在倒置顯微鏡下刮擦生長融合成片的ESCs以制備寬度為100um的“離體的單

4、層表皮細胞損傷”模型。模型制備后24、48、72h，倒置顯微鏡下計數(shù)每高倍視野越過創(chuàng)緣遷移到創(chuàng)面的ESCs細胞數(shù)，并用sigmaScan pro5軟件計算創(chuàng)面愈合率，用MTT法檢測表皮干細胞的增殖分化活性，判斷雌激素對ESCs分裂增殖活性的影響。
　　 結果：
　　 1.動物實驗比較各個時間點的傷腔容積和創(chuàng)面愈合率，單純手術組和假手術組的傷腔容積明顯小于去卵巢組；單純手術組和假手術組的創(chuàng)面愈合率明顯大于去卵巢組（P＜0.

5、01），而單純手術組和假手術組之間無明顯差異。損傷早期（1-3天）ER-β表達逐漸加強，主要在真皮層，單純手術組和假手術組ER-β表達與去卵巢組相比無明顯差別；7天ER-β表達逐漸加強，主要表達在真皮層，表皮層可見部分表達；14天ER-β表達仍在較高的水平，尤其表皮層表達明顯，且7-14天單純手術組和假手術組ER-β表達與去卵巢組相比有明顯差別；21天ER-β有所減弱，但在表皮層及真皮血管中仍有較強表達。
　　 2.細胞實驗流式

6、細胞儀檢測第二代ESCs整合素?1，ck19，ck14和ck10抗原陽性率(分別是96.63％，95.47％，94.27％，1.32％)。雌激素組、雌激素受體阻斷劑組和空白組的ER-?抗原陽性表達率（66.43％，43.47％，54.27％）。雌激素組、雌激素受體阻斷劑組和空白組越過創(chuàng)緣進入創(chuàng)面的細胞在傷后24小時分別（33.6±0.34），（8.5±0.75）和（11.4±0.45）個/高倍視野；48h分別有（67.5±0.24），（

7、27.5±0.35）和（38.5±0.45）個/高倍視野；72h分別有（117.5±0.35），（63.5±0.35）和（78.5±0.45）個/高倍視野。3組傷后72小時創(chuàng)面愈合率分別為（69.00±0.05）％，（35.00±0.05）％，（48.00±0.06）％。上述指標雌激素組與空白組和雌激素受體阻斷劑組具有顯著差異（P＜0.01)，空白組與雌激素受體阻斷劑組比較，差異性顯著(P＜0.01)。
　　 結論：