臭氧應(yīng)激對(duì)氣道粘膜細(xì)胞群落和粘蛋白表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的:應(yīng)用臭氧應(yīng)激建立哮喘大鼠模型，觀察臭氧應(yīng)激不同時(shí)間大鼠氣道粘膜細(xì)胞群落和粘蛋白表達(dá)譜的變化，并探討二者之間的關(guān)系，以期進(jìn)一步解釋氣道粘液高分泌機(jī)制，尋找氣道高反應(yīng)時(shí)粘液分泌紊亂的潛在干預(yù)靶點(diǎn)，為粘液高分泌性氣道疾病的治療提供一種新思路。
　　方法:①SD大鼠20只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組與臭氧應(yīng)激組，每組10只。分別檢測兩組大鼠的呼氣相氣道阻力(expiratoryairwayresistance，Re)，支氣管肺泡灌洗液中總蛋

2、白含量測定及細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類;測定血漿IgE含量;肺、支氣管病理切片。②SD大鼠20只，隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組;臭氧分別應(yīng)激1、3、5、7天，各為一組，每組4只。分別取每組大鼠相同部位氣管制作標(biāo)本，采用掃描電鏡方法觀察與正常對(duì)照組相比較，臭氧應(yīng)激不同時(shí)間動(dòng)物氣道上皮細(xì)胞群落的變化。③20只SD大鼠隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組;臭氧分別應(yīng)激1、3、5、7天，各為一組，每組4只。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)實(shí)驗(yàn)研究臭氧應(yīng)激不同時(shí)間大鼠氣道

3、中粘蛋白Muc5ac、Muc5bmRNA表達(dá)量。制作切片，采用PAS染色結(jié)合免疫圖像分析系統(tǒng)對(duì)粘液儲(chǔ)備量進(jìn)行測定。
　　結(jié)果:①采用臭氧攻擊支氣管上皮細(xì)胞形成的變異性氣道高反應(yīng)性模型，各項(xiàng)指標(biāo)（Re、BALF中細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、血漿IgE含量、肺和支氣管病理切片）的測定都證實(shí)了氣道高反應(yīng)性的存在;②正常大鼠氣管上皮幾乎全部被纖毛覆蓋，少見或不可見杯狀細(xì)胞與Clara細(xì)胞和基底細(xì)胞。損傷初期纖毛細(xì)胞脫落、數(shù)量減少，暴露出Clara細(xì)胞。

4、隨著臭氧持續(xù)應(yīng)激損傷加重，纖毛細(xì)胞脫落加劇，Clara細(xì)胞數(shù)量減少，杯狀細(xì)胞增多，未在纖毛細(xì)胞脫落處觀察到杯狀細(xì)胞。應(yīng)激至第7天，杯狀細(xì)胞數(shù)密度和比例增加至最多但增幅下降，纖毛細(xì)胞減至25‰少見Clara細(xì)胞。③RT-PCR:臭氧應(yīng)激組大鼠氣道內(nèi)粘蛋白Muc5ac、Muc5bmRNA的表達(dá)均高于正常對(duì)照組，且與臭氧應(yīng)激時(shí)間成正比。PAS:正常大鼠氣道內(nèi)有少量粘液。隨著應(yīng)激時(shí)間延長，粘蛋白染色加深、總量遞增。
　　結(jié)論:氣道高反應(yīng)模