巴曲酶用藥次數(shù)對腦缺血再灌注沙土鼠腦保護(hù)作用的影響.pdf

1、腦卒中(中風(fēng))是中老年人發(fā)病率較高的疾病。急性腦卒中的早期可表現(xiàn)為運動、感覺、認(rèn)知方面功能障礙及生活不能自理，如不能得到及時有效的干預(yù)，將遺留神經(jīng)功能缺陷，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給其家庭和社會造成極大的負(fù)擔(dān)。目前對腦卒中的治療方法主要包括急性期常規(guī)藥物治療及康復(fù)治療，其中超早期溶栓治療是治療缺血性腦卒中的最有效方法，但溶栓治療受時間、技術(shù)、設(shè)備的影響，使其應(yīng)用受到限制，因而探討針對缺血性腦卒中巴曲酶的最佳腦保護(hù)作用總量的研究及其安全性

2、顯得較為重要。 巴曲酶可直接作用于血漿纖維蛋白元，形成易于被纖溶系統(tǒng)清除的非交聯(lián)的纖維蛋白單體或多聚體，還可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞釋放t-pA，且增強t-pA的作用，降低纖溶酶原活化劑抑制劑的活性，降低血漿纖維蛋白原，降低血小板黏附力。 巴曲酶對腦缺血后抗細(xì)胞凋亡的最佳總量實驗研究尚未有報道，因而探討巴曲酶對沙土鼠前腦缺血再灌注后抗細(xì)胞凋亡的最佳總量，可以為巴曲酶在臨床上的合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。 本課題選用不同總劑量的巴曲

3、酶沙土鼠腹腔注射觀察腦保護(hù)作用的強弱來探討其最佳總給藥劑量。在缺血再灌注模型的基礎(chǔ)上通過沙土鼠腹腔注射(8BU/Kg·次)巴曲酶，觀察不同用藥次數(shù)的海馬CA1區(qū)的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化以及流式細(xì)胞儀來檢測凋亡細(xì)胞比例來了解巴曲酶的抗細(xì)胞凋亡作用。 研究已表明，Bcl-2家族中Bcl-2和Bax是與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切的兩個基因。Bcl-2為抗凋亡基因，可抑制各種因素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，保護(hù)并延長細(xì)胞壽命；Bax為促凋亡基因，一方面它自己有促進(jìn)

4、凋亡的作用，另一方面它還能抑制Bcl-2的表達(dá)。通過統(tǒng)計不同次數(shù)用藥組的海馬CA1區(qū)Bcl-2、Bax陽性細(xì)胞數(shù)的情況來闡明巴曲酶的腦保護(hù)作用和Bcl-2、Bax的表達(dá)的關(guān)系，揭示巴曲酶腦保護(hù)作用的機制。 課題分為三個部分。第一部分：用流式細(xì)胞儀檢測方法來探討巴曲酶對沙土鼠腦缺血后海馬CA1區(qū)抗細(xì)胞凋亡作用的最佳總劑量；第二部分：通過電鏡觀察比較不同巴曲酶用藥總量對IR沙土鼠腦海馬CA1區(qū)超微結(jié)構(gòu)改變的影響；第三部分：巴曲酶對腦

5、缺血沙土鼠腦保護(hù)作用的可能機制的研究。 　研究結(jié)果： (一)IR后，模型組細(xì)胞凋亡數(shù)為10.36±2.58％，3次組為7.27±1.10％，4次用藥組細(xì)胞凋亡數(shù)為5.64±0.27％，5次用藥組細(xì)胞凋亡數(shù)為4.34±0.93％，6次組細(xì)胞凋亡數(shù)為4.68±1.29％，正常組細(xì)胞凋亡數(shù)為0.35+0.12％。經(jīng)統(tǒng)計分析，提示：泊IR組凋亡細(xì)胞數(shù)顯著高于各用藥組(P<0.05)，4次用藥組細(xì)胞凋亡率要低于3次用藥組，組間比較

6、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，5次用藥組細(xì)胞凋亡數(shù)顯著低于4次用藥組(P<0.05)，而5次用藥組與6次用藥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。這說明腦IR后5次用藥組腦保護(hù)作用效果好于3次和4次組，但是>5次的用藥腦保護(hù)作用并不好于5次用藥。 (二)超微結(jié)構(gòu)觀察顯示IR組細(xì)胞凋亡顯著，胞質(zhì)內(nèi)空泡明顯，線粒體腫脹，部分膜崩解，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔擴大，核膜部分皺折，染色體聚集靠邊，附于核膜碎裂。3次及4次用藥組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變輕

7、于IR組，但仍可見到胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器空泡樣變，核周空泡，染色質(zhì)仍有斷裂靠近核膜的現(xiàn)象，可見到凋亡小體。5次用藥組的海馬CA1區(qū)細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷要明顯輕于3次及4次用藥組，胞質(zhì)內(nèi)空泡較少，核膜相對完整。而6次組和5次組超微結(jié)構(gòu)改變不明顯。這也說明5次的用藥效果要好于3次及4次用藥。 根據(jù)(一)(二)結(jié)果，我們認(rèn)為在腦IR后巴曲酶(8BU/Kg·次)5次用藥為沙土鼠腦保護(hù)的最佳總劑量。 (三)然后將沙土鼠隨機分為手術(shù)對照組，巴曲酶3

8、次用藥組，4次用藥組，5次用藥組，免疫組化檢測各組海馬CA1區(qū)Bcl-2、Bax陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)情況，結(jié)果顯示：隨著巴曲酶用藥次數(shù)增加,Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)逐漸增加，5次用藥組陽性細(xì)胞數(shù)最高，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而Bax陽性細(xì)胞數(shù)隨著巴曲酶的用藥次數(shù)的增加而逐漸減少，3次用藥組Bax陽性細(xì)胞數(shù)最多(45.82±4.27)而五次用藥組Bax陽性細(xì)胞數(shù)最少(35.85±2.49)，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)合(一)(二)的試驗結(jié)果我們