甲醛誘導(dǎo)小鼠生殖發(fā)育毒性及其機(jī)理研究.pdf

1、目的：本課題擬從體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)、體外胚胎培養(yǎng)、細(xì)胞水平和分子水平探討甲醛(Formaldehyde，F(xiàn)A)的生殖發(fā)育毒性，闡明其機(jī)理，為進(jìn)一步研究甲醛對機(jī)體的遠(yuǎn)期效應(yīng)和制定甲醛安全性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)應(yīng)用經(jīng)胎盤遺傳毒性試驗(yàn)觀察甲醛對胎肝血微核率和胎肝染色體畸變率的影響。體外實(shí)驗(yàn)是將孕8.5天齡的昆明種小鼠脫頸處死，分離胚胎，采用全胚胎培養(yǎng)技術(shù)(wholeembryoculture，WEC)，將其置入含有不同濃度甲醛(

2、0，3，9，27，81μmol/L)的大鼠即刻離心血清(immediatelycentrifugalserum，ICS)中旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)48小時(shí)，利用光學(xué)顯微鏡、解剖顯微鏡、中性紅活體染色、組織切片HE染色及流式細(xì)胞儀等技術(shù)，觀察甲醛對體外培養(yǎng)小鼠胚胎生長發(fā)育和組織器官形態(tài)分化的影響；為了研究甲醛生殖發(fā)育毒性的預(yù)防方法，在ICS中加入VitC，觀察VitC對甲醛誘導(dǎo)胚胎生長發(fā)育毒性的干預(yù)作用；應(yīng)用分光光度法觀察甲醛對胚胎組織谷光甘肽(glut

3、athion，GSH)含量和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的影響以分析其機(jī)制。結(jié)果：1.甲醛可通過胎盤屏障誘導(dǎo)胎鼠的染色體損傷。2.甲醛能影響體外器官形成期的昆明種小鼠胚胎生長發(fā)育，具有一定的胚胎毒性，呈劑量-效應(yīng)關(guān)系和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，以神經(jīng)管閉合不全、體位翻轉(zhuǎn)不全、腦部形態(tài)異常、心臟發(fā)育遲緩等畸形為特征；甲醛可致VYS及胚胎神經(jīng)管、腦組織、心臟等結(jié)構(gòu)明顯受損，各濃度組胚胎畸形部位細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測

4、發(fā)現(xiàn)甲醛可引起小鼠胚胎細(xì)胞周期發(fā)生變化，且出現(xiàn)典型的亞二倍體凋亡峰；中性紅活體染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲醛染毒組，胚胎腦部、眼、鰓弓、心、肢芽、體節(jié)、尾部等部位出現(xiàn)大量的死亡細(xì)胞。3.甲醛能引起胚胎組織中GSH含量下降和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量升高。4.VitC能有效地干預(yù)甲醛的胚胎生長發(fā)育毒性。結(jié)論：1.甲醛對體外培養(yǎng)的8.5天齡昆明種小鼠胚胎具有直接的胚胎毒性和致畸性。2.甲醛損傷卵黃囊結(jié)構(gòu)和功能；能影響小鼠胚胎細(xì)胞周期分布，干擾胚胎細(xì)胞正常