FISH技術(shù)檢測宮頸脫落上皮細(xì)胞hTERC基因的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：
　　 1.探討熒光原位雜交技術(shù)（FISH）檢測宮頸脫落細(xì)胞hTERC基因的取材及制片方法。
　　 2.探討正常與異常宮頸鱗狀上皮中hTERC基因的表達(dá)情況及臨床意義。
　　 3.分析高危型HPV感染的CIN中hTERC基因的表達(dá)情況與臨床意義。
　　 方法：
　　 1.FISH技術(shù)的制片方法；收集2007年9月至2008年3月，解放軍總醫(yī)院婦科門診就診282例婦女的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，根據(jù)不

2、同的取材及制片方法分為3組：直接涂片法（15張）、TCT制片法（205張）、低滲滴片法（62張）。應(yīng)用FISH技術(shù)，對上述玻片進(jìn)行hTERC基因檢測，比較不同制片方法的細(xì)胞數(shù)量、玻片背景、熒光信號強度和雜交成功率。
　　 2.選擇行細(xì)胞學(xué)檢查患者的宮頸脫落細(xì)胞305例為研究對象，依據(jù)細(xì)胞學(xué)診斷分為五組：正常組、ASCUS組、ASC-H組、LSIL組、HSIL組，同時選擇細(xì)胞正常婦女的宮頸脫落細(xì)胞20例為對照組建立實驗室閾值；對其

3、中115例患者行陰道鏡及活檢，依據(jù)組織學(xué)結(jié)果分為四組：正常組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ/SCC組，對以上樣本均應(yīng)用FISH技術(shù)檢測hTERC基因的表達(dá)情況。
　　 3.采用HPV基因雜交信號捕獲檢測技術(shù)（HC2）法，對上述115例組織學(xué)診斷為正常、CIN、SCC患者的宮頸分泌物行高危型HPV-DNA檢測，分析高危型HPV感染與hTERC基因表達(dá)在不同級別宮頸病變中的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.不同的取

4、材及制片方法雜交成功率不同：共進(jìn)行試驗282例，總雜交成功率為74.1％（208/282）。直接涂片法、TCT制片法、低滲滴片法雜交成功率分別為53.3％、81.9％、51.6％，TCT制片組成功率明顯高于其它兩組，差異具有顯著性（p<0.05）。同時，TCT組的細(xì)胞數(shù)量及分布、背景干凈程度、熒光信號滿意度均優(yōu)于其它組。
　　 2.細(xì)胞學(xué)分級中正常組、ASCUS組、ASC-H組、LSIL組、HSIL組hTERC基因陽性表達(dá)率分別

5、為8.5％、11.3％、25.8％、41.0％、77.4％。ASC-H組、LSIL組、HSIL組與正常組比較，hTERC基因陽性表達(dá)率有顯著差異（P<0.05）。其中ASCUS組與LSIL組、HSIL組，ASC-H組與HSIL組，LSIL組與HSIL組差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；組織學(xué)分級中，正常組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ/SCC組hTERC基因陽性表達(dá)率分別為7.3％、38.5％、63.2％、78.6％。CINⅠ組

6、、CINⅡ組、CINⅢ/SCC組與正常組比較，hTERC基因陽性率有顯著差異（P<0.05）。CINⅠ組與CINⅢ/SCC組比較，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。隨組織學(xué)病變程度增加，hTERC基因陽性率增加。
　　 3.hTERC基因檢測CIN和HSIL/SCC的敏感度、特異度hTERC基因檢測CIN的敏感度、特異度分別為67.56％、92.68％；hTERC基因檢測HSIL/SCC的敏感度、特異度分別為78.57％、9

7、2.68％。
　　 4.在高危型HPV感染的62例CIN中，hTERC基因擴增比例75.8％（47/62），其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中擴增比例分別為80.0％（4/5）、64.7％（11/17）、80.0％（32/40）；而在12例HPV陰性病例中，hTERC基因擴增的比例為25.0％（3/12）。HPV感染組與非感染組間比較具有顯著性差異）。在50例hTERC基因擴增陽性的病例中，HPV陽性所占的比例為94.0％（47

8、/50），而HPV陰性所占比例僅為6.0％（3/50）。CIN組與正常對照組比較，hTERC基因擴增比例增加。在正常對照的宮頸細(xì)胞中，3號染色體hTERC基因多表達(dá)為兩個雜交信號，而在CIN組細(xì)胞中可觀察到明確的超二倍體現(xiàn)象，異常擴增類型多為2：3、2：4、3：3、4：4等。隨病變進(jìn)展，多倍體比例增加。
　　 結(jié)論：
　　 1.應(yīng)用雙色FISH技術(shù)檢測宮頸脫落細(xì)胞hTERC基因時，TCT制片法優(yōu)于直接涂片法與低滲滴片法，