異丙酚抑制長效酰胺類局麻藥致大鼠中毒驚厥作用的比較.pdf

1、目的:應(yīng)用三種長效酰胺類局麻藥左旋布比卡因、羅哌卡因和布比卡因致大鼠中毒驚厥模型,給予靜脈全麻藥異丙酚抑制驚厥,觀察海馬c-fos、一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)的活性表達(dá)變化,比較異丙酚抑制這三種局麻藥致驚厥的作用。
　　 方法:
　　 1實驗分組及動物模型的制備
　　 健康雄性Wistar大鼠64只,體重25±20g(河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)。隨機分為對照組(C組),左旋布比卡因組(L組)

2、,羅哌卡因組(R組),布比卡因組(B組),四組再按同源配對設(shè)計分為實驗組(EG)和異丙酚處理組(PG)兩個亞組(n=8),共計8組。大鼠腹腔注射10％水合氯醛350mg/kg麻醉后,于尾靜脈放置24號套管針,接肝素帽再貼好敷貼備用。24小時后,將連有延長管的注射器與大鼠(清醒)尾靜脈留置針上的肝素帽相連,再將注射器連接微量注射泵,之后按照實驗分組給予不同的處理:L組、R組和B組的實驗組(EG)分別經(jīng)尾靜脈持續(xù)泵入0.75％左旋布比卡因、

3、0.75％羅哌卡因以和0.75％布比卡因,速度均為2mg-kg-1·min-1,觀察給局麻藥后大鼠的臨床表現(xiàn),出現(xiàn)驚厥反應(yīng)(全身不自主或不協(xié)調(diào)的抽搐)后立即停止泵入局麻藥,持續(xù)泵入生理鹽水。異丙酚處理組(PG)按照實驗組泵入上述的局麻藥,出現(xiàn)驚厥反應(yīng)后立即停藥,2mg/kg的劑量緩慢(15秒)靜推異丙酚(用5％葡萄糖注射液稀釋一倍),然后持續(xù)泵入生理鹽水。C組的實驗組(EG):生理鹽水以3ml/h的速度經(jīng)尾靜脈持續(xù)泵入,異丙酚處理組(P

4、G)泵入生理鹽水的時間與預(yù)實驗中求得的L組泵入左布比卡因時間的95％可信區(qū)間相當(dāng),再同上述異丙酚處理組,靜推異丙酚。記錄從給藥到發(fā)生驚厥的時間。各組均給以面罩吸氧,出現(xiàn)呼吸抑制者給予輔助呼吸。
　　 2標(biāo)本的采集及檢測方法
　　 驚厥發(fā)生2小時后,在深麻醉下斷頭取腦,用濾紙吸去血液,剝離海馬組織,取一側(cè)的海馬組織浸入4％多聚甲醛溶液中4℃保存?zhèn)溆?。將另一?cè)的海馬組織放在冷凍管中,凍存于液氮。
　　 2.1海馬CA

5、1區(qū)c-fos表達(dá)的測定
　　 取出浸入4％多聚甲醛溶液中保存的海馬組織,之后酒精脫水,二甲苯透明,浸蠟,包埋,連續(xù)冠狀切片(片厚4μm),EliVision puls免疫組化法染色。每組隨機選擇8張切片,每張切片在海馬組織分別隨機取5個高倍(10×40)視野,以胞核染成棕黃色作為陽性細(xì)胞,計數(shù)c-fos陽性細(xì)胞數(shù)。計算出各組的實驗組和異丙酚處理組的差值D與實驗組的比值K(K=D/EG)。
　　 2.2海馬一氧化氮(NO

6、)含量和一氧化氮合成酶(NOS)活性的測定
　　 將保存于液氮的海馬組織稱重后,用冷生理鹽水作勻漿介質(zhì),在盛有冰塊的器皿中用玻璃勻漿器研磨成10％的組織均漿。4℃,3000r/min離心20min,取上清液。于-30℃以下低溫保存待測。NO的測定采用硝酸還原酶法:NO與分子氧反應(yīng)生成NO2-,并轉(zhuǎn)化成NO3-和NO2-采用還原法使NO3-還原為NO2-,測定NO2-的量可作為NO生成的良好指標(biāo)。NOS的測定是依據(jù)NOS催化L-精

7、氨酸(L-Arg)生成NO,NO與二價鐵配合物(呈色劑)形成有色物,測定其值即代表NOS活性.具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。計算出各組的實驗組和異丙酚處理組的差值D與實驗組的比值K(K=D/EG)。
　　 c-fos陽性細(xì)胞數(shù),一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性分別計算出平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差,數(shù)據(jù)以-x±s表示,采用SPSS13.0軟件進(jìn)行方差分析及t檢驗,P＜0.05表示差異有顯著性。
　　 結(jié)果:
　　 1各組間體重比

8、較差異無統(tǒng)計學(xué)意義
　　 2各組驚厥出現(xiàn)時間及異丙酚的抗驚厥作用
　　 除C組外各組均見驚厥出現(xiàn)。各實驗組從泵入局麻藥到出現(xiàn)驚厥的時間(min)分別為,L組:10.63±4.809;R組:12.63±7.836;B組:7.75±3.919,驚厥持續(xù)約半分鐘到一分鐘,能自行停止,若驚厥致死則棄之。各異丙酚處理組在給予異丙酚后很快抑制驚厥(多在15秒內(nèi)),如頭面部及四肢抽搐甚至角弓反張消失,呼吸急促轉(zhuǎn)為平穩(wěn)而無呼吸抑制,整體

9、處于安靜狀態(tài),甚至有些大鼠在15秒靜推異丙酚過程中即抑制驚厥,從整體表現(xiàn)以及時間觀察,異丙酚抑制各組驚厥發(fā)生的表現(xiàn)沒有明顯的區(qū)別。
　　 3海馬CA1區(qū)c-fos表達(dá)的比較
　　 與C組的實驗組比較,L組、R組和B組的實驗組海馬CA1區(qū)c-fos陽性細(xì)胞數(shù)均顯著增多,差異有顯著性(P＜0.05)。在L組、R組和B組中,與對應(yīng)的實驗組比較,異丙酚處理組海馬CA1區(qū)c-fos陽性細(xì)胞數(shù)均明顯減少(P＜0.05),表明異丙酚均

10、能抑制這三種局麻藥致驚厥引起的c-fos增加;與B組c-fos陽性細(xì)胞數(shù)K值相比,L組與R組K值均明顯減小(P＜0.05),L組與R組K值比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 4海馬NO含量的比較
　　 與C組的實驗組比較,L組、R組和B組的實驗組海馬NO含量均顯著增多(P＜0.05)。在L組、R組和B組中,與對應(yīng)的實驗組比較,異丙酚處理組海馬NO含量均明顯降低(P＜0.05)。與B組NO含量K值相比,L組與R組K值

11、均明顯減小(P＜0.05),L組與R組K值比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 5海馬NOS活性表達(dá)的比較
　　 與C組實驗組比較,L組、R組和B組的實驗組NOS活性表達(dá)均顯著增多(P＜0.05)。在L組、R組和B組中,與對應(yīng)的實驗組比較,異丙酚處理組海馬NOS活性表達(dá)明顯減少(P＜0.05),與B組NOS活性K值相比,L組與R組K值均明顯減小,L組與R組K值比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:異