兔源致病性大腸桿菌OMPs差異性分析及主要OMP免疫保護(hù)性的初步研究.pdf

1、隨著我國養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展，家兔的疫病流行也呈現(xiàn)出新規(guī)律，其中家兔腹瀉尤其是大腸桿菌性腹瀉，已成為仔幼兔生長受阻和死亡率高的重要原因之一。本研究在對兔源致病性大腸桿菌進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定的基礎(chǔ)上，再對該地區(qū)的兔源致病性大腸桿菌分離株的OMP及其分型進(jìn)行系統(tǒng)的研究，以便了解該地區(qū)的兔源致病性大腸桿菌分離株的遺傳相關(guān)性，給防治本病提供依據(jù)；進(jìn)一步通過動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)，研究代表菌株外膜蛋白在體液和細(xì)胞免疫水平上誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動物免疫保護(hù)的效果。為下一

2、步研制臨床免疫制劑和疫苗提供了一定基礎(chǔ)，必將會大大推動兔大腸桿菌病的診斷和防治工作的進(jìn)步，有利于兔養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。本研究共分三部分： 1.兔源致病性大腸桿菌的分離鑒定本研究2003，2004，2005年連續(xù)三年從濰坊某地區(qū)的7個兔場采取典型腹瀉病、死兔的肝臟和各段腸管的內(nèi)容物以及健康兔糞便或直腸拭子做為備檢材料共152份。通過常規(guī)的方法分離鑒定方法，共鑒定出典型大腸桿菌共166(2003年為47株，2004年為68株，2005年為

3、51株)株，通過致病性試驗(yàn)初步鑒定出兔源致病性大腸桿菌共為96株(2003年為28株，2004年為46株，2005年為32株)，并選擇代表菌株做了藥物敏感試驗(yàn)。研究內(nèi)容包括流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)、病理形態(tài)學(xué)、病原形態(tài)及理化特征、藥敏試驗(yàn)等，從中發(fā)現(xiàn)了一些規(guī)律和特點(diǎn)，填充了家兔大腸桿菌病的研究內(nèi)容，對有效地診斷和防治家兔大腸桿菌病具有一定的指導(dǎo)意義。 2.致病性大腸桿菌外膜蛋白型的確立及差異性分析提取從該地區(qū)分離并鑒定為致病性大腸埃希

4、氏菌的菌株的OMP，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測外膜蛋白，確立其外膜蛋白型(OMPs)，衡量不同菌株2遺傳相關(guān)性，并在此基礎(chǔ)上對近三年該地區(qū)致病性大腸桿菌的外膜蛋白型(OMPs)進(jìn)行年間差異性分析，三年共產(chǎn)生了三種OMP型(A-C)，2003年分離鑒定的致病性大腸桿菌共28株，其中10株分屬于OMP-A，12株分屬于OMP-B，4株分屬于OMP-C；2004年分離鑒定的致病性大腸桿菌共46株，其中13株分屬于OMP-A，22株分屬于OMP

5、-B，11株分屬于OMP-C；2005分離鑒定的致病性大腸桿菌共32株，其中8株分屬于OMP-A，15株分屬于OMP-B，9株分屬于OMP-C。結(jié)果表明致病性大腸桿菌在同年份具有遺傳多樣性；不同年份之間具有差異性，呈現(xiàn)出一定的規(guī)律和特點(diǎn)。這為今后研究大腸桿菌的傳播、消亡和搞好防治工作提供了寶貴的基礎(chǔ)材料。 3.外膜蛋白免疫保護(hù)性的初步研究為了觀察免疫家兔對腸致病性大腸桿菌外膜蛋白的免疫應(yīng)答以及其誘導(dǎo)免疫保護(hù)的能力，以提純的兔源致

6、病性大腸桿菌WF0305株的外膜蛋白(outermembraneprotein，OMP)皮下注射兔，免疫組僅注射佐劑，于免疫前及免疫后38天分別收集血清，抗血清能與三種不同OMP型的大腸桿菌在玻片上與菌體產(chǎn)生直接凝集反應(yīng)。間接ELISA法檢測對不同OMP型的外膜蛋白的抗體效價，結(jié)果顯示，免疫組的家兔免疫在三免后免疫血清中抗OMP的抗體效價均可高達(dá)1：25600；小鼠的半數(shù)保護(hù)量均在0.03～0.06ml之間。采用MTT法檢測OMP對體外