鯉魚Galanin和Galanin受體1的克隆及其mRNA表達(dá)水平的研究.pdf

1、本文采用RT-PCT方法和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)，從鯉魚(Cyprinuscarpio)全腦和下丘腦總RNA中進(jìn)行擴(kuò)增，得到鯉魚GalanincDNA全序列。該cDNA全長(zhǎng)有兩種形式，Ⅰ型GalanincDNA全長(zhǎng)680bp，Ⅱ型614bp。Ⅰ型ORF為429bp，所編碼的前體Galanin蛋白為142個(gè)氨基酸；Ⅱ型ORF為357bp，所編碼的前體Galanin蛋白為118個(gè)氨基酸，包括32個(gè)氨基酸的信號(hào)肽(SignalP

2、eptide)、Galanin成熟29肽和Galanin信息聯(lián)合肽(Galaninmessageassociatedpeptide，GMAP)。同源性分析表明，鯉魚與金魚(Carassiusauratus)同源性最高，與哺乳動(dòng)物同源性較低。進(jìn)化樹分析表明，鯉魚Galanin與同為鯉科的金魚Galanin在同一進(jìn)化支上，與鳥類、哺乳動(dòng)物不在同一分支。 采用兩步法RT-PCR對(duì)Galanin在鯉魚成體各組織的表達(dá)情況進(jìn)行了初步的研究

3、。成體組織分布結(jié)果顯示，Galanin在不同腦區(qū)都有表達(dá)，但在延腦、中腦、嗅球、下丘腦等的表達(dá)豐度比其他腦區(qū)高；在外周組織的卵巢、肝臟、心臟、皮膚、前腸、中腸、后腸、脾臟、精巢也能檢測(cè)到有Galanin表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Galanin作為神經(jīng)激素調(diào)節(jié)促性腺激素的分泌，對(duì)下丘腦—垂體—性腺軸其生殖調(diào)控作用，也可能作為神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)調(diào)質(zhì)、自分泌和旁分泌調(diào)節(jié)因子，參與魚類神經(jīng)內(nèi)分泌的其他活動(dòng)。 為了更好地了解Galanin在鯉魚中的

4、生理功能，我們利用PCR方法從鯉魚全腦和下丘腦總RNA克隆了Galanin受體Ⅰ(GalR1)的cDNA全長(zhǎng)序列。GalR1cDNA全長(zhǎng)為1757bp，，編碼區(qū)1041bp，編碼一條346個(gè)氨基酸的多肽鏈。經(jīng)過SMART分析，鯉魚GalR1是一個(gè)七次跨膜蛋白。同源性分析表明，鯉魚GalR1與斑馬魚GalR1同源性最高。進(jìn)化樹分析表明，鯉魚GalR1與斑馬魚在GalR1在同一分支，而哺乳類GalR1則在另一分支，此結(jié)果與同源性比較相一致。