荷載IL-24基因的條件增殖型腺病毒聯(lián)合替莫唑胺治療黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究荷載IL-24基因的條件增殖型腺病毒ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合烷化劑替莫唑胺對(duì)黑色素瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響并探討其可能的協(xié)同促凋亡機(jī)制。
　　方法：腺病毒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，擴(kuò)增，測(cè)定滴度。將PBS、ZD55-EGFP、TMZ、ZD55-IL-24、KI67-ZD55、KI67-ZD55-IL-24、ZD55-EGFP聯(lián)合TMZ、ZD55-IL-24聯(lián)合TMZ、KI67-ZD55-IL-2

2、4聯(lián)合TMZ分別作用于黑色素瘤A375、M14細(xì)胞。CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖;結(jié)晶紫法檢測(cè)細(xì)胞毒性;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)病毒Hexon蛋白及KI67基礎(chǔ)表達(dá);Annexin V-FITC/PI及Hochest33258法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;Western Blot法檢測(cè)腺病毒E1A、IL-24蛋白及MGMT，Bax、Bcl-2、Mcl-1、Procaspase-3、NF-κB、P53凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：腺病毒ZD55-E

3、GFP、ZD55-IL-24、KI67-ZD55、KI67-ZD55-IL-24的滴度分別為7.1×109 ifu/ml，4.0×1010 ifu/ml、1.4×1010 ifu/ml、1.9×1010 ifu/ml; CCK8結(jié)果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合TMZ對(duì)黑色素瘤A375、M14細(xì)胞均有明顯的抑制增殖作用，中效原理分析提示兩者有協(xié)同作用;結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)提示KI67-ZD55-IL-24的細(xì)胞毒性強(qiáng)

4、于ZD55-EGFP、ZD55-IL-24、KI67-ZD55;免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)提示KI67在3種黑色素瘤細(xì)胞株A375、M14及MV3中高表達(dá)，TMZ不影響病毒的復(fù)制;Annexin V-FITC/PI及Hochest33258結(jié)果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合TMZ作用于A375、M14細(xì)胞凋亡效應(yīng)明顯增加;Western Blot結(jié)果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合TMZ作

5、用的A375、M14細(xì)胞能復(fù)制并表達(dá)IL-24，同時(shí)Bax的表達(dá)量增加，Mcl-1、Bcl-2的表達(dá)量均降低，Procaspase-3發(fā)生了明顯剪切;ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24可引起黑色素瘤細(xì)胞p53蛋白表達(dá)上調(diào)，MGMT蛋白表達(dá)下調(diào)。
　　結(jié)論：攜帶IL-24基因的條件增殖型腺病毒ZD55-IL-24、 KI67-ZD55-IL-24聯(lián)合化療藥物TMZ有協(xié)同抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡的作用。這種腫瘤