血管生成因子AGGF1對后肢缺血小鼠的治療作用研究.pdf

1、外周血管疾病(PeripheralArterialDisease,PAD)通常由動脈粥樣硬化導致,它會導致外周血管的狹窄甚至是閉塞,從而阻止血流流入到下肢末端。隨著現(xiàn)代老年化程度的加劇,PAD的發(fā)病率也呈上升趨勢,在成年人中的發(fā)病率達到了12％。在美國大約有8百萬到1千2百萬PAD患者。德國的流行病學報道大于65歲的老人中,女性發(fā)病率達到17%,而男性甚至達到20%?，F(xiàn)有病例表明,PAD嚴重地影響了生活質(zhì)量,患病率和死亡率增加,嚴重下肢

2、缺血患者1年生存率為25%。并且,46%-71%的PAD患者同時患有冠心病,不少于10%的PAD患者還有腦血管疾病。
　　一些PAD患者可能會要求下肢截肢,從而緩解疼痛,改善生活環(huán)境。為了避免截肢或者其他更為嚴重的后果,往往采取血管造影,支架或者血管外科手術(shù),使得血流得以恢復(fù)。然而,接受血管手術(shù)的PAD患者的長期生存率遠低于接受類似手術(shù)的冠心病患者的生存率。更為重要的是,很多PAD患者并不一定適合血管支架或者血管外科手術(shù)。所以,采

3、用血管生成因子進行治療性血管新生,加速血管新生和微環(huán)境循環(huán),在最近20年中被認為是一種新的大有發(fā)展前途的PAD治療手段。不論以何種注射方式,例如DNA質(zhì)?；蛘咧亟M蛋白,將血管生成因子導入,可能加速血管新生,加快側(cè)枝循環(huán),也有利于血流再灌到缺血組織中。
　　通過實驗,主要驗證了作為新的血管生成因子AGGF1是否能作為血管新生治療藥物用于嚴重后肢缺血小鼠的治療,從而驗證是否能用于下肢缺血疾病患者的治療。在整個試驗中,能得到了以下結(jié)果:

4、
　　(1)注射到腓腸肌的真核表達質(zhì)粒AGGF1能夠成功的轉(zhuǎn)錄生成mRNA并翻譯生成AGGF1蛋白。真核表達質(zhì)粒注射到腓腸肌后,發(fā)現(xiàn)外源性的AGGF1可以持續(xù)高表達2周,隨著時間延長到4周,外源性AGGF1的表達量降低,接近開始的水平。
　　(2)AGGF1的高表達可增加缺血后肢的血流流速。采用高分辨率小動物超聲檢測小鼠后肢血流。結(jié)扎手術(shù)后一天,發(fā)現(xiàn)結(jié)扎腿比假手術(shù)腿的血流比例出現(xiàn)了明顯的下降,僅為10%左右。彩色脈沖多普勒超

5、聲結(jié)果表現(xiàn)注射AGGF1后肢缺血小鼠的血流流速明顯高于對照組小鼠的后肢血流,DNA注射后7天,14天和28天,其P值分別為0.016,0.0034和0.0012。
　　對缺血后肢進行了行為學評分,主要指標評分指標為后肢組織壞死和運動能力損傷。注射AGGF1的后肢缺血小鼠的這2項指標都明顯低于注射空質(zhì)粒的后肢缺血小鼠。
　　(3)AGGF1高表達能抑制缺血引起的組織壞死。通過對注射DNA治理后7天的后肢缺血老鼠腓腸肌組織進行切

6、片HE染色,發(fā)現(xiàn)AGGF1可以明顯抑制由缺血導致的細胞組織壞死情況。
　　(4)過表達AGGF1可以加速缺血的腓腸肌的血管新生。將注射質(zhì)粒的后肢缺血小鼠的腓腸肌組織切片進行CD31免疫組化檢測,發(fā)現(xiàn)注射AGGF1的小鼠血管新生能力明顯好于注射空質(zhì)粒的小鼠(P<0.01)。AGGF1高表達能促進缺血后肢的血管新生。
　　另外,注射AGGF1質(zhì)粒和注射空質(zhì)粒的后肢缺血老鼠的VEGF的表達量沒有發(fā)生改變。
　　總而言之,實驗